Bacillus subtilis'ten termostabil lipaz üretimi ve karakterizasyonu

Bu çalışmada yağ fabrikasından alınan toprak örneklerinden 27 bakteri suşu izole edilmiş, bunlar Bacillus sp. olarak tanılanmıştır. Söz konusu suşların 8 (%29,62) tanesi lipolitik aktivite göstermiştir. Tributyrin agarda en yüksek lipaz aktivitesi (en geniş hidroliz zonu) gösteren TKL-25 nolu izolat lipaz üreticisi olarak seçilmiş ve VITEK-2 tanılama sistemi ile Bacillus subtilis olarak tanılanmıştır.En iyi enzim üretimi (optimum koşullar) pH 10.0 ve 40°C'de gerçekleşmiştir.Enzim pH=4.0-9.0, 20-110°C aralığında aktivite göstermiş, optimum aktivite pH 5.0'de, 80°C'de saptanmıştır. pH=3.0-10.0 aralığında 5 farklı pH tamponu ile 30 dk. muamele sonrası enzimin kalan aktivitesi pH=8.0'de %56, pH=3.6'da %43, pH=7.6'da %41 bulunmuştur. Diğer pH koşullarında enzim aktivitesi %30'un altında korunmuştur. Enzim 50-120°C arasındaki sıcaklıklarda 30 dk. inkübasyona bırakıldıktan sonra, 50°C'de %176, 60°C'de %209, 70°C'de %176, 80°C'de %192, 90°C'de %161, 100°C'de %171, 110°C'de %135, 120°C'de %124 kalan aktivite görülmüştür.Enzim inhibitörler ve şelatörlerin 2 farklı konsantrasyonu ile 30 dk. muamele edildiğinde aktivite farklı düzeylerde korunmuştur. Bunlar sırasıyla; PMSF (5 mM) %54, ß-merkaptoetanol (%0.5) %27, MgCl2 (5 mM) %23, CaCl2 (5mM) %21, MnCl2 (5 mM) %21, SDS %21 şeklindedir. Aktivite FeCl2 ile tamamen inhibe olmuştur.Enzim 2 farklı konsantrasyonda (%20-40) organik solventler ile 30 dk. muamele edilmiştir. Lipolitik aktivite, %20 kloroform varlığında %9 indüklenmiş, %40 kloroform varlığında %68, %20 etanol varlığında %30, %20 metanol varlığında %24, %20 aseton varlığında %20, %40 gliserol varlığında %23 korunmuştur. %40 metanol, 2-propanol ve 2-butanol varlığında ise aktivite tamamen inhibe olmuştur.SDS-PAGE analizi ile 17.5 kDa moleküler ağırlığa sahip tek bir protein bandı saptanmıştır.Bacillus subtilis TKL-25 nolu suş mezofil, üretilen enzim asido-termofilik-termostabil karakter göstermektedir. Lipaz üreticisi suşun mezofil, üretilen enzimin termofil olması, fermentasyon prosesi süresince enerji gereksinimi bakımından, endüstriyel boyuttaki üretimlerde önemli bir avantaj sağlayacaktır.