Astacus leptodactylus ryanodin reseptör geninin klonlanması

Sitoplazmik Ca2+ konsantrasyonu, çizgili kas liflerinde elektro-mekanik bağlantı gibi birçok hücresel fonksiyonda önemli bir rol oynamaktadır. Ryanodin reseptörü (RyR), sarkoplasmik retikulumdan (SR) Ca2+ salınımına aracılık eden, 4 eş alt birimli yapıya sahiptir. 2.2MDa büyüklüğüyle en büyük iyon kanalıdır. Omurgalı ve omurgasız RyR kanalları yapısal ve fonksiyonel olarak benzerdir. Astacus leptodactylus, dar pençeli kerevit, nörobilim gibi birçok çalışmada kullanılan yaygın bir model hayvan olmasına karşın genetik bilgileri oldukça kısıtlıdır. Bu çalışma, en büyük kanalı kodlayan kerevitRyR mRNA molekülünün de novo klonlaması üzerine odaklanmaktadır. RyR mRNA molekülleri arasındaki homoloji ve yeni nesil sekanslama verisinin hesaplamalı birleştirilmesiyle ifade edilen hibrid klonlama metodu kullanılmıştır. 15236 bp uzunluğunda mRNA molekülü klonlandı. 5042 amino asitlik varsayılan RyR proteini, diğer türlerden elde edilen sekanslarla önemli bir benzerliğe sahiptir. Ayrıca, varsayılan RyR sekansı, RyR kanalına spesifik birçok korunmuş alanlara sahiptir. Böylece, bu çalışmada, RyR kanalını kodlayan mRNA molekülünün özgün biçimde klonlandığı ileri sürülmektedir. Ortaya çıkarılan bu genetik bilginin yardımıyla üç boyutlu protein yapısı da belirlenebilir ya da ilerideki mutasyon çalışmaları tasarlanabilir.