Bicarinalin antimikrobiyal peptidinin Helicobacter pylori üzerine antimikrobiyal aktivitesinin, etki mekanizmalarının ve sinerjitik etkilerinin belirlenmesi

Helicobacter pylori, insan midesinde kolonize olan ve gastrointestinal sistemle ilgili çeşitli enfeksiyonlara, hastalıklara ve kansere yol açan Gram-negatif bir bakteridir. H. pylori'nin eradikasyonu, bakterinin artan antibiyotik direnci nedeniyle günümüze kadar gelen süreçte zor hale gelmiştir. Çalışmamızın amacı Tetramorium bicarinatum'dan elde edilen karınca zehiri peptidi olarak bilinen Bicarinalin antimikrobiyal peptidinin H. pylori'ye karşı aktivitesini ve tedavide kullanılan ilaçlarla sinerjitik etkilerini bulmaktır. Bu amaç doğrultusunda, disk/well difüzyon ve mikrodilüsyon deneylerini kullanarak, H. pylori'nin referans suşu ile stoklarımızda bulunan klinik izolatlarına karşı bicarinalin AMP'nin belirlenen konsantrasyonlarının antibakteriyel aktivitesi test edilmiştir. Pozitif kontrol olarak ve Levofloksasin kullanılmıştır. MIC99 değerleri 600nm'de OD ölçümü yapılarak belirlenmiştir. Daha sonra, Bicarinalin'in H. pylori'nin hücre içi proteinleri ve DNA'sı üzerindeki etkisi kolorimetrik test yoluyla analiz edilmiş, protein sızıntısının tahmini için Bradford yöntemi kullanılmıştır. Ardından, hücresel hasar etkileri taramalı elektron mikroskobu (SEM) ile doğrulanmıştır. Son olarak, disk difüzyon yöntemiyle, Bicarinalin'in sinerjik etkisi Levofloksasin, Clarithromycin ve Tobramycin ile kombinasyon halinde test edilmiştir. Sonuç olarak, bicarinalinin MIC99 değerleri referans suş ve klinik izolat için sırasıyla 4.8μg/mL ve 4.9μg/mL olarak belirlenmiştir. Etki mekanizmalrı için değerlendirilen protein ve DNA makromoleküllerinin hücreden dış ortama sırasıyla %33.25 ve %55.10 oranlarında sızdığı belirlenmiştir. SEM görüntülerinde de hücre membran yapısının bozunduğu, hücrelerin birbirine penetre olduğu, morfolojik yapının bozulduğu gözlemlenmiştir. Son olarak Bicarinalin'in sinerjitik etkisi değerlendirilmiş ve halihazırda tedavide kullanılan levofloksasin, klaritromisin ve tobramisin antibiyotiklerinin inhibisyon çaplarını artırdığı belirlenmiştir.