Diospyros kaki yaprak ve meyve özütlerinin gram (+) replikatif dna polimeraz (POLC) üzerine inhibisyonunun araştırılması

Diospyros kaki (D. kaki) bitkisinin replikatif DNA polimeraz inhibisyonu, antimikrobiyal aktivitesi ve bazı kimyasal içeriklerinin çalışıldığı bu yüksek lisans tezinde bitkinin yaprak ve meyve kısımları kullanıldı. Replikatif bakteriyal DNA polimeraz olarak Bacillus subtilis (B. subtilis) replikatif DNA polimeraz IIIα (PolC) seçildi. Rekombinant üretim aşaması PolC'yi kodlayan genin PZR ile çoğaltılması ve pET-100 TOPO vektörüne klonlanmasıyla sağlandı. Rekombinant protein E. coli BL21 hücrelerinde üretildi ve Nikel Affinite kromotografi kullanırak saflaştırıldı. İnhibisyonun belirlenmesi için primer uzatma deneylerinde kullanılmak üzere bitkinin meyve ve yapraklarının metanol ve DMSO özütleri hazırlandı. Hazırlanan metanol özütleri PolC'ye karşı kullanıldı. Primer uzatma deneylerinde florojenik primer ihtiva eden ve sentetik olarak dizayn edilen 45/20-mer DNA kullanıldı. Diospyros kaki bitkisinin yaprak özütünün PolC üzerinde güçlü bir şekilde inhibisyon gösterdiği gözlemlenirken meyve özütünün ise PolC üzerinde inhibisyon etkisi göstermediği belirlendi. Hazırlanan DMSO özütleri ise antimikrobiyal aktivite için kullanıldı. Diospyros kaki yaprak özütlerinin hem Gram (-) hemde Gram (+) olmak üzere iki grup bakteri üzerinde de antimikrobiyal aktiviteye sahip olduğu tespit edildi. D. kaki bitkisinin inhibisyon görülen yapraklarından eter ve metanol özütlerinin HPLC-DAD ile fenolik bileşikleri aydınlatıldı. D. kaki bitkisi yaprak özütlerinde rutin türevleri ve kamferol bulundu.