Doğal izolat bacıllus suşlarından keratinaz enzimi üretimi ve karakterizasyonu

Bacillus sp., keratinaz adı verilen proteaz enziminini üretebilen mikroorganizma türlerdir. Çözünmeyen keratin substratlarını parçalama kabiliyetine sahip bu enzim ö hücre dışı proteolitik indüklenebilir enzim sınıfına girmektedir. Bu araştırmada, tavuk üretim çiftliği toprağından izole edilen Bacillus suşlarının, SkimMmilk Agar besiyerinde proteolititik aktiviteleri belirlenmiştir. 63 Bacillus suşu proteolitik olarak belirlenmiştir. Bu suşlardan 9 tanesi keratin-azure substratı ile aktivite göstererek keratinolitik olarak belirlenmiştir. İzole edilmiş suşlardan 30 nolu suş en iyi keratinaz üreticisi olarak seçilmiştir. Keratinaz üretmek için temel tüylü besiyeri kullanılmıştır. Enzimin optimum üretim koşulları pH=8.0 ve 30ºC olarak belirlenmiştir. Enzimin optimum aktivite gösterdiği pH: 9.0 sıcaklık 50 ºC dir. Enzim 50-100 ºC'lerde 30 dk inkübe edildiğinde 50 ºC lik ön inkübasyondan sonra aktivitesini yüksek oranda (%90) oranda korumuş, 70 derecenin üzerindeki inkübasyonlardan sonra hiç aktivite göstermemişti. Enzimin kimyasal ve metal iyonlarının 1-5 mM konsantrasyonları ile 30 dakikalık ön inkübasyonundan sonra tween 20 (%215) ve SDS'nin (%204) önemli oranda aktiviteyi arttırdiğı belirlenirken, EDTA (%76), Üre (%40), ZnCl2 (%28), MgCl2 (%51) , NiCl2 (%24), CaCl2 (%56), HgCl2 % (0) ve CuCl2 (%83) aktiviteyi azaltmıştır. Anahtar Kelimeler: Bacillus sp., Keratin, Keratinaz , Enzim Üretimi, Karakterizasyon