Elektrokimyasal HE4 immünosensörünün geliştirilmesi

Bu araştırmada, bir kanser biyobelirteci olan insan epididimis protein 4'ün (HE4) elektrokimyasal tayini için yeni bir immünosensör geliştirilmiş ve insan kan serumu numunelerinde uygulaması gerçekleştirilmiştir. Çalışmada yüzey baskılı karbon elektrotlar (SPCE) ilk olarak indirgenmiş grafen oksit (RGO) ile modifiye edilmiş ardından elektropolimerizasyon tekniği uygulanarak elektrot yüzeyi politiyonin ile kaplanmış, son olarak elektrodepozisyon ile altın nanoparçacıklar (AuNP) yüzeyde oluşturulmuştur. SPCE/RGO/PTH/AuNP elektrodunun elektrokimyasal karakterizasyonu dönüşümlü voltametri (CV), diferansiyel puls voltametri (DPV), kare dalga voltametri (SWV) ve elektrokimyasal empedans spektroskopisi (EIS) metotları kullanılarak yapılmıştır. SPCE/RGO/PTH/AuNP elektrotların yüzeyine Anti-HE4'ün immobilizasyonu 3-merkaptopropiyonik asit (3-MPA) ve 1-etil-3-(3-dimetilamino-propil) karbodiimid/N-hidroksisüksinimid (EDC/NHS) kullanılarak kovalent bağlama yöntemi ile gerçekleştirilmiştir. Hazırlanan HE4 immünosensörünün optimum çalışma parametreleri DPV ve EIS metotları ile belirlenmiş ve optimum Anti-HE4 konsantrasyonu 33,33 µg/mL, optimum Anti-HE4 inkübasyon süresi 45 dk ve optimum HE4 inkübasyon süresi 30 dk olarak bulunmuştur. Optimum şartlarda elektrokimyasal HE4 immünosensörünün analitiksel karakterizasyonu yapılmıştır. EIS, DPV ve SWV metotları ile belirlenen doğrusal tayin aralıkları 1-100 pg.mL-1, tespit limitleri sırasıyla 2,16 pg.mL-1, 1,04 pg.mL-1 ve 1,16 pg.mL-1 olarak belirlenmiştir. HE4 immünosensörünün tekrarlanabilirliği 50 ng.mL-1 HE4 konsantrasyonu için test edilmiş ve bağıl standart sapma (R.S.D.) değerleri EIS, DPV ve SWV metotları için sırasıyla %4,09 (n=10), %4,29 (n=10) ve %1,95 (n=10) olarak hesaplanmıştır. Geliştirilen HE4 immünosensörünün uygulama kararlığı 60 gün boyunca, depolama kararlığı ise 12 hafta depolama süresince voltametrik metotlarla incelenmiştir. HE4 immünosensörünün seçiciliği 9 farklı antijen karışımı varlığında HE4'ün analizinin yapılmasıyla test edilmiş ve antijen karışımının % 3,67'lik bir girişim yaptığı bulunmuştur. Hazırlanan HE4 immünosensörleri insan kan serumu örneklerine bilinen miktarda ilave edilen farklı konsantrasyonlardaki HE4'ün analizi için kullanılmış ve %95'in üstünde geri kazanımlar elde edilmiştir.