T lenfosit yanıtlarının nötrofil, monosit ve akciğer adenokarsinom hücrelerini içeren ko-kültürlerde analizi

CD4+ ve CD8+ T hücreleri, anti-tümör immün yanıtlarında kritik aracılardır. Nötrofillerle beraber, küçük hücreli dışı akciğer kanserinin (KHDAK) tümör mikroçevresinde fazla miktarlarda bulundukları gösterilmiştir. Ayrıca, bir dizi çalışma, akciğer kanserinde nötrofil/lenfosit oranının prognostik önemini göstermiştir. Bununla birlikte, nötrofillerin immün düzenleyici rolü henüz tam olarak açıklanamamıştır. Bu nedenle, bu çalışma, nötrofiller, monositler ve akciğer adenokarsinom hücrelerinin varlığında T hücre yanıtlarını değerlendirmeyi amaçlamaktadır. Periferik kan nötrofilleri, CD14+ monositler ve CD8+ ve CD4+ T hücreleri sağlıklı bireylerden toplanan kanlardan izole edilmiştir. Ko-kültürleri optimize etmek için, bu hücre tiplerinin farklı kombinasyonları ile ve çeşitli uyaranlar varlığında ko-kültürler oluşturulmuştur. Nötrofiller IFN-γ, G-CSF, NAC ve fMLP ile uyarılmıştır. Farklı oranlarda, önceden uyarılmış veya yeni izole edilmiş nötrofiller, KHDAK hücre hatları (A549, NCI-H1299 veya NCI-H441 ve/veya monositler) ile birlikte ko-kültür edilmiştir. T hücreleri üzerindeki antijenden bağımsız etkileri test etmek için çözünür anti-human CD3 monoklonal antikoru eklenmiştir. İmmün hücrelerin proliferasyonu, canlılığı, aktivasyonu, ROS üretim kapasitesi, sitokin üretimi, ve kostimülatör gen ekspresyonu belirli hücre tiplerinde test edilmiştir. TIM-3mod/high alt popülasyonun yorulmuş olup olmadığını anlamak için, TIM-3 ekspresyonuna göre, CD8+ T hücreleri ko-kültürlerden toplanarak yeniden uyarılmıştır. G-CSF ve NAC ile uyarılan nötrofillerde, ROS üretimi düşerek canlılık süresi artmıştır ve bu nötrofillerin T hücre proliferasyonunu da desteklediği görülmüştür. Kanser hücrelerinin ve monositlerin varlığı, nötrofillerin yaşam sürelerini uzatmış, üzerlerindeki CD62L ekspresyonunu düşürmüş ve ROS üretim kapasitelilerini azaltmıştır. Monositlerin, nötrofillerin ve akciğer kanseri hücrelerinin varlığı, CD8+ T hücre çoğalmasını ve üzerlerindeki inhibitör reseptörlerinin ekspresyonunu arttırmıştır. T hücre proliferasyonunun ana destekçileri olarak monositlerden yoksun olan belirli koşullar altında, akciğer kanseri hücreleri ile birlikte nötrofillerin varlığında CD8+ T hücre proliferasyonu ve aktivasyonu engellenmemiştir. KHDAK ko-kültürlerinden toplanan TIM-3mod/high CD8+ T hücreleri yüksek proliferasyon ve IFN-γ üretimi kapasitesine sahip olup yorulmamış hücre oldukları gösterilmiştir. NAC eklenen ko-kültürlerde CD8+ T hücre proliferasyonu veya TIM-3/LAG3 ekspresyonu değişmemiştir. Akciğer kanseri hücreleri, monositler ve CD8+ T hücreler ile birlikte kültürlenen nötrofillerde 4-1BBL, OX40L ve B7-2 kostimülatör genlerinin ekspresyonu artmıştır. Nötrofiller, monositler, CD8+ T hücreleri ve akciğer kanseri hücrelerini kullanarak tümör mikroçevresini kısmen modellemek için kurulan bir ko-kültür düzeninde, bulgularımız nötrofillerin CD8+ T hücre yanıtları için kritik bir modülatör olarak önemini göstermektedir.