Cloning of mouse lysozyme and interleukin-2 genes and using as anti-tumoral dna vaccine in malign melanoma

ÖZETFare Lizozim ve İnterlökin-2 Genlerinin Klonlanması ve MalignMelanomada Anti-tümöral DNA Aşısı Olarak KullanılmasıAli İrfan GÜZELİmmünokompetent konakçılar potansiyel olarak anormal hücreleritanıyabilmekte ve onları öldürerek çoğalmalarını engellemektedir. Fakat, tümörimmünojenitesindeki zayıflık veya tümör tarafından indüklenen immüniteyi baskılayıcıçevreden kaynaklanan savunma sistemindeki bozukluklar anormal hücrelerin immüntaramadan kurtulmasına neden olurlar. İmmünotedavinin hedeflerinden biri, konakçıimmün yanıtlarını anormal hücreleri tanıyabilecek ve onları yok edecek şekildemanipüle etmektir.Bu tez çalışmasının amacı: fare interlökin-2 (IL-2) ve lizozim genlerini pHM6memeli ekspresyon vektörüne klonlamak ve B-16V melanoma hücrelerindeimmünotedavi maksadıyla kullanmaktır. Daha önce yapılan değişik çalışmalarda, IL-2hem protein hem de DNA aşısı formunda, lizozim ise yalnızca protein formundakullanılmıştır. Anti-bakteriyel aktivite yanında anti-tümör ve immünomodülatör etkilerede sahip olduğu bilinen lizozim ilk defa bu çalışmada DNA aşısı formundakullanılmıştır.Lizozim ve IL-2 genlerinin DNA aşısı formunda kullanılmaları durumundaoluşturacakları anti-tümörijenik etkiyi değerlendirmek için dört değişik denemeyapılmıştır; 1) farelerin (inbred C57BL/6) deri altında B-16V melanoma hücreleriyleoluşturulmuş olan tümör kitleleri içine, IL-2 ve Lys genleri klonlanmış olanrekombinant pHM6 plazmitleri (pHM6mIL-2 ve pHM6mLys) lipozomla kompleksoluşturularak enjekte edilmiştir. 2) B-16V hücrelerinin enjeksiyonundan iki gün önceaynı bölgeye, rekombinant plazmit-lipozom kompleksleri farelerin deri altına enjekteedilmiştir. 3) Rekombinant plazmit vektörlerin B-16V hücrelerine in vitrotransfeksiyonu sonucu geliştirilmiş olan transfekte tümör hücreleri (B-16VpHM6mIL-2ve B-16VpHM6mLys) farelerin deri altına enjekte edilmiştir. 4) Deneme 3?ün tümörgeliştirmeyen farelerine B-16V hücreleri tekrar enjekte edilmiştir.Dört denemenin 15 grubunda toplam 277 fare kullanılmıştır. deneme 1 ve 2?ninsonuçları göstermiştir ki tümör oluşmadan önce veya sonra IL-2 ve lizozim genlerinitaşıyan plazmitlerin enjeksiyonu tümör büyümesini önemli derecedeyavaşlatamamıştır. Fakat, deneme 3?de, fareler B-16VpHM6mIL-2 için %32, B-16VpHM6mLys için %51.7, B-16VpHM6mLys + B-16VpHM6mIL-2 için ise %49.2oranında tümör geliştirmemiştir. Deneme 3?deki uygulamadan sonra yaşayan fareleretekrar B-16V hücresi enjekte edildiğinde (4. uygulama) sağ kalan farelerin hiçbirindetümör oluşmaması koruyucu immünite geliştiğine işaret etmektedir. Bu sonuçlar,plazmit DNA gibi bir ajan aracılığı ile tümör hücrelerinde yüksek düzeyde salgılatılmasıdurumunda, lizozimin de tümör immünotedavisinde kullanılabileceğini göstermektedir.Anahtar Sözcükler: B-16V, C57BL/6, DNA Aşısı, IL-2, Lizozim, pHM6 plazmitvektörü, Tümör immünotedavisi