Genetiği değiştirilmiş ürünlerin çoklu real-time PCR ile belirlenmesi

Ticari değeri olan genetiği değiştirilmiş organizmaların (GDO) sayısı vebunları belirlemek için geliştirilen moleküler teknikler sürekli değişmektedir. Bununsonucunda GDO laboratuvarları ve gıda üretim endüstrisi ham materyallerde vekompleks işlenmiş gıda ürünlerinde güvenilir farklı yöntemleri uygulamayazorlanmaktadır. Bu çalışmada GDO analizlerinde çoğunlukla kullanılan 35S(karnabahar mozaik virüs promotörü), NOS (Agrobacterium tumefaciens'in nopalinsentez geni terminatörü), FMV (Sıracaotu mozaik virüsünün 35S promotörü) ve Bar(Streptomyces hygroscopicus toprak bakterisi) genlerini belirlemek için çoklu realtimePCR sistemlerinin geliştirilmesi amaçlanmıştır. Bunlara ek olarak, PCRreaksiyonlarında engelleyici bir maddenin olup olmadığını kontrol edebilmek içindahili pozitif kontrol (IPC) ve bitki DNA'sının olup olmadığını belirlemek için bitkispesifik (18sR) probları kullanılmıştır. Real-time PCR reaksiyonlarında üç adet 35S,üç adet NOS, bir adet FMV ve 1 adet Bar genlerinin TaqManTM problarınınkombinasyonları test edilmiştir. Sonuç olarak, ikili, üçlü ve dörtlü real-time PCRyöntemleri IPC ve 18sR genlerini içerecek şekilde geliştirilmiştir. Tümkombinasyonlar hem Applied Biosystem (ABI 7500) hem de Strategene (Mx3005P)firmalarının Real-time PCR cihazlarında yapılmıştır. Geliştirilen yöntemlerin GDOlaboratuvarlarında tarama için ucuz ve uygun olduğu bulunmuştur.Anahtar Kelimeler: Genetiği değiştirilmiş organizma (GDO), Real-Time PCR,Multipleks.