İdrar yolları enfeksiyonu etkeni E.coli'lerin adezinleri ile antibiyotik direnci arasındaki ilişkinin klasik ve moleküler yöntemlerle araştırılması

Ağustos 2006 ? Eylül 2007 tarihleri arasında polikliniklere başvuran hastaların idrar örneklerinde, idrar yolu enfeksiyonu tanısı alan hastalardan klasik, bakteri identifikasyonu, antibiyotik duyarlılık, Vitek-32 sistem ve disk difüzyon metodu ile GSBL varlığı yönünden araştırılmıştır.Araştırma için 50 GSBL pozitif, 50 GSBL negatif toplam 100 hastada E.coli suşunda virulans genleri ve GSBL genleri araştırılmıştır.GSBL pozitif olarak tespit edilen bakteriler ve antibiyotik duyarlılığı pozitif GSBL negatif olan bakterilerin gen araştırılması için SYBR Green I ile Erime Eğrisi Analizi yapılarak PZR testi uygulanmıştır.GSBL pozitif bulunan 50 suşun 50'si (%100,0) ampisillin, seftazidim, seftriakson'a karşı dirençli, (%100,0) ise sefotetan ve imipenem'e duyarlı olduğu belirlenmiştir.GSBL pozitif bulunan 50 adet E.coli suşlarının GSBL genleri pozitifliği yönünden; 45'inde (%90,0) TEM geni, 6'sında (%12,0) SHV geni, 30'unda (%60,0) CTX-M geni bulunmuştur. Ayrıca bu suşların 15'inde (%30,0) pap, 35'inde (%70,0) fimA, 3'ünde (%6,0) sfa virulans faktörleri pozitif bulunmuştur. Çalışmamızda kullanılan 3 suşta GSBL genleri ve E.coli virulans faktörlerinden hiç biri bulunamamıştır.GSBL pozitif bulunan 50 adet E.coli suşlarında GSBL genlerinin bir suşta aynı anda birden fazla bulunma durumlarında; 6'sında (%12,0) TEM ve SHV geni, 28'inde (%56,0) TEM ve CTX-M geni, 5'inde (%10,0) SHV ve CTX-M geni ve 5'inde (%10,0) TEM, SHV ve CTX-M geni birlikte saptanmıştır.GSBL pozitif bulunan E.coli suşlarında virulans faktörlerinin bir suşta aynı anda birden fazla bulunma durumlarında; 14'ünde (%28,0) pap ve fimA, 2'sinde (%4,0) pap ve sfa, 2'sinde (%4,0) fimA ve sfa ve 2'sinde (%4,0) pap, fimA ve sfa virulans faktörleri birlikte bulunduğu görülmüştür.GSBL pozitif suşlarda disk difüzyon yöntemi ile yapılan tarama testinde bütün suşlar Ertapeneme duyarlı olarak tespit edilmiştir. Çift disk sinerji testinde 50 adet suşun 44'ünde (%88,0) GSBL pozitif, kombine disk difüzyon testinde 50 suşun 45'inde (%90,0) GSBL pozitif bulunmuştur.GSBL negatif 50 adet E.coli suşlarının GSBL genleri pozitifliği yönünden 50'sinde (%100,0) TEM geni, 11'inde (%22,0) SHV geni bulunmuş, ancak hiçbir suşta CTX-M geni bulunamamıştır. Ayrıca 20'sinde (%40,0) pap, 37'sinde (%74,0) fim-A, 13'ünde (%26,0) sfa virulans faktörlerinin bulunduğu görülmüştür.GSBL negatif 50 adet E.coli suşlarının GSBL genlerinin bir suşta aynı anda birden fazla bulunma durumlarında; 11'inde (%22,0) TEM ve SHV geni bulunmuş, ancak hiçbir suşta TEM ve CTX-M geni, SHV ve CTX-M geni ve TEM, SHV ve CTX-M geni birlikte bulunamamıştır.GSBL negatif 50 adet E.coli suşlarının virulans faktörlerinin bir suşta aynı anda birden fazla bulunma durumlarında; 16'sında (%32,0) pap ve fimA, 9'unda (%18,0) pap ve sfa, 10'unda (%20,0) fimA ve sfa, 8'inde (%16,0) pap, fimA ve sfa virulans faktörleri birlikte saptanmıştır.GSBL pozitif bulunan E.coli suşlarının GSBL genlerinin saptanması SYBR Green kullanılarak PZR yapılmış ve bu çalışmada Erime Eğrisi Analizi ile doğrulama eğrileri hazırlanmıştır.Sonuçların istatistiksel değerlendirmesinde SPSS 10.0 programında Ki-kare testi kullanılmıştır. İstatistiksel analiz için p<0.05 istatistiksel anlamlılık düzeyi olarak kabul edilmiştir.GSBL pozitif suşlarda E.coli virulans faktörleri ile GSBL genleri arasında bulunmaları açısından ileri derecede anlamlı (p < 0,003) bir ilişki saptanıştır.GSBL pozitif suşlarda virulans faktörleri bulunması ile GSBL genleri bulunması arasında yapılan değerlendirmede suşlarda tek bir virulans faktörü bulunması halinde CTX-M geninin bulunması istatistiksel olarak ileri derecede anlamlı (p<0,0001) olduğu saptanmıştır.GSBL pozitif suşlarda her bir virulans faktörleri ayrı ayrı GSBL genleri ile aralarındaki ilişkileri incelendiğinde; fimA virulans faktörü ile CTX-M geni arasında anlamlı (p< 0,002) olduğu bulunmuştur.GSBL pozitif suşlarda virulans faktörleri arasında pap geni ile fimA geni arasında her ikisini de aynı anda bulunması açısından da anlamlı (p < 0,018) olduğu belirlenmiştir.GSBL negatif olan suşlarda GSBL ve virulans faktörleri arasındaki ilişki Pearson Korelasyon ile araştırılmış, pap ile sfa virulans faktörlerinin bir arada bulunduğu (p<0,012) belirlenmiştir.Çalışmamızın tüm verileri ışığında; E.coli suşlarının virulans faktörlerinden fimA ile GSBL oluşturan genlerden CTX-M'in ilişkili olduğu, GSBL pozitif ve negatif suşlarda aynı anda birden fazla virulans faktörünün bulunabileceği, GSBL pozitif suşlarda CTX-M geni ile istatistiksel olarak anlamlı bir ilişki bulunduğu bu genin GSBL negatif suşların hiç birinde saptanmadığı görülmektedir. CTX-M geninin beta-laktam grubu antibiyotiklere direnç gelişiminde daha baskın olduğu görülmektedir.