Erkek infertilitesi için germ kök hücre havuzunun leptin ilavesi ve gen düzenleme ile iyileştirilmesi

İnfertilite çiftlerin %12-15'ini etkiler ve erkek faktörler bu vakaların %30-55 nedenidir. Travmalar, genetik bozukluklar, immusupresif ve kanser tedavileri, infertiliteye neden olsa da birçok infertil vaka idiyopatiktir. Kanser tedavi sırasında gonadotoksik tedavilere maruz kalan çocukluk çağı kanser hastaları için en önemli sorunlardan birisi fertilitenin devamının sağlanmasıdır. Bu hastalar için tedavi öncesi spermatogonyal kök hücreler (SKH) içeren testiküler dokuların dondurulması fertilitenin korunmasında tek etkili yoldur. Küçük testis biyopsi dokularından elde edilen SKH'lerin transplantasyon öncesi in vitro koşullarda kültüre edilmesi ve çoğaltılması gerekmektedir, Sperm elde edilmesi veya SKH kültürü MCM8 gen bozukluğu olan infertil olan hastalarda mümkün değildir. Bu infertil olan hastalar için, somatik hücrelerinden elde edilen indüklenmiş pluripotent kök hücreler (İPKH) mutasyon düzeltildikten sonra germ kök hücrelerine farklılaştırılabilir. Bu tez çalışmasının hipotezi, leptin ilavesi SKH havuzunu zenginleştirebilir ve azoospermik Mcm8-/- fare modelinde mutasyon CRISPR/Cas9 ile düzeltildikten sonra primordiyal germ hücre benzeri hücrelere farklılaştırılabilir. C67BL/6 neonatal SKH izole edilip, kültüre edildive kültüre SKH' ler leptin (0-200 ng/ml) ile muamale edilerek proliferasyon testleri ile etki ve western blotlama ile ERK ve STAT3 yolakları üzerinden etkinin mekanizması araştırıldı. 100 ng/ml leptin SKH çoğalmasını ERK and STAT3 sinyal yolakları üzerinden arttırdı. Mcm8-/- fibroblastlardan iki yeni İPKH hattı (591ve 574) üretildi. CRISPR/Cas9 gen düzenleme ile bir alleli mutasyon olmayan Mcm8 gen dizisi içeren koloni (Mcm8gc-/-) (591-14) elde edildi. Mutasyonu düzeltilmiş olan heterozigot koloniden SSEA1+/CD61+ primordiyal germ hücre benzeri hücreler farklılaştırıldı. Bu çalışma, çocukluk çağı kanser hastalarında, SKH havuzunun in vitro olarak transplantasyon öncesi çoğaltılması ve spermatogenez restorasyonuna ve tek gen mutasyonu nedeniyle infertil olan hastalarda mutasyonun CRISPR/Cas9 gen düzenleme teknolojisi ile düzeltilmesine olanak sağlar.