İnsan embriyonal karsinom hücre hattında küçük VCP ile etkileşen protein (SVIP) ve etkileşimde olduğu ubikütin proteazom sistem proteinlerinin ekspresyonlarının belirlenmesi

SVIP, endoplasmik retikulumla ilişkili protein yıkımında görevli olan p97/VCP 'ye bağlanarak fonksiyonunu ve otofajiyi düzenleyen bir proteindir. SVIP'in sinir sistemi harici diğer hücre ve dokulardaki ekspresyonu hakkında literatürde çok az çalışma vardır. SVIP ile ilgili yapılan son çalışmalar SVIP'ın androjene duyarlı bir protein olduğunu ve ekspresyonunun androjenler tarafından düzenlendiğini göstermiştir. Androjenler, önemli steroid hormonlardır ve ikincil cinsiyet özellik gelişiminde etkileri büyüktür. Ayrıca erkek üreme sisteminde spermatogenezin başlaması ve devam etmesinde de rolleri vardır. Androjen reseptörlerinin mutasyonları genellikle erkek üreme gelişimi bozukluğu olan hastalarda görülür ve erkek infertilitesine neden olabilir. İnfertilite popülasyonun yaklaşık %7'sini etkileyen patolojik bir durumdur. Testis tümörleri 15-34 yaş arası erkeklerde en sık görülen malign tümörlerdir. Testis tümörlerinin yaklaşık %95'i germ hücrelerinden kaynaklanır. Erkek üreme sisteminde ubikütin proteazom sisteminin (UPS), infertilite üzerinde etkisi olduğuna dair çalışmalar vardır. Bu nedenle UPS'in bileşenleri olan USP26 ve UXT ekspresyonlarının araştırılması testis biyolojisi için önemlidir. Bu bilgiler ışığında tezimde insan testis embriyonal karsinom hücrelerinde (CRL-2073) SVIP ve etkileşimde olduğu UPS proteinlerinin ekspresyonlarını belirlemek için ve SVIP siRNA transfeksiyonu sonrası baskılanan SVIP ekspresyonunun diğer proteinler üzerindeki etkilerini görmek için SVIP, AR, Ubikutin, USP26 ve UXT ekspresyonları immunofloresan, western blot ve qRT-PCT yöntemleriyle analiz edilmiştir. Ayrıca kontrol grubu olarak daha önce SVIP ekspresyonu gösterilmiş olan insan Leydig ve fare Sertoli hücre hattları kullanılmıştır. CRL-207 hücrelerinde kontrol siRNA ve SVIP siRNA grupları karşılaştırıldğında immunofloresan ve western blot sonuçlarına göre SVIP, AR ve USP26 ve Ubikutin ekspresyonları azalmış, UXT ekspresyonu ise artmıştır. qRT-PCR sonucuna göre ise SVIP siRNA verilen grupta SVIP gen ekspresyonu azalmış, AR,Ubikutin, USP26 ve UXT gen ekspreyonları artmıştır. Sonuç olarak bu çalışma ile insan testis embriyonal karsinom hücrelerinde ilk defa SVIP ve etkileşimde olduğu UPS proteinlerinin ekspresyonu gösterildi ve literatüre önemli bir katkı sağlandı. Anahtar kelimeler: Embriyonal karsinom, SVIP, UPS, AR.