İnsan olfaktör mukozadan elde edilen nöral kök hücrelerin dopaminerjik nöron benzeri hücrelere farklılaştırılması

Başlık: İnsan olfaktör mukozadan elde edilen nöral kök hücrelerin dopaminerjik nöron benzeri hücrelere farklılaştırılması Amaç: Bu tez çalışmasında, in vitro kök hücre izolasyonu yöntemleri gerçekleştirilerek; insan olfaktör mukozadan (iOM) nöral kök hücrelerin izole edilmesi, çoğaltılması ve karakterizasyon analizlerinin gerçekleştirilerek, belirli nörotrofik faktörlerin etkisi altında in vitro ortamda dopaminerjik nöron benzeri hücrelere farklılaştırılması amaçlanmıştır. Yöntem: İnsan olfaktör mukozadan nöral kök hücreler (iO-NKH) izole edilip, karakterizasyonları için immunofenotipik ve MTT analizleri gerçekleştirildi. iO-NKH'ler, 3B kültüre edilerek nörosferik yapılar oluşturuldu. Nörosferlerin karakterizasyon analizleri için immunofenotipik ve nöronal farklılaştırma analizleri gerçekleştirildi. Daha sonra iO-NKH'ler in vitro dopaminerjik nöron benzeri hücrelere farklılaştırıldı. Farklılaştırma analizi sonrası, dopaminerjik nöron benzeri hücrelerin immunofenotipik ve genotipik karakterizasyon analizleri yapıldı. Bulgular: iOM'den NKH izolasyonu gerçekleştirilerek NKH'lere özgü hücre belirteçlerinin (CD56, CD133, SOX2 ve NESTİN) pozitif ekspresyonları gösterildi. Karakterizasyon analizleri için nöronal ve glial yönde farklılaştırılan nörosferlerin, nöronal ve glial hücrelere özgü hücre belirteçleri (TUBB3, GFAP, NG2) immunofloresan işaretleme ile pozitif olarak gösterildi. İn vitro dopaminerjik nörona farklılaştırılan iO-NKH'lerin dopaminerjik nörona özgü protein (TH) ve gen (Dat, TH, Pitx3, Nurr1) ile karakterizasyonu için immunositokimyasal ve qRT-PCR analizleri gerçekleştirildi. Sonuç olarak dopaminerjik nörona özgü proteinin (TH) pozitifliği ve genlerinin (Dat, TH, Pitx3, Nurr1) ekspresyonunun anlamlı ölçüde arttığı gözlendi. Sonuç: Elde edilen sonuçlara göre, nörodejeneratif hastalıklarda hücre replasman tedavilerinde kullanılabilecek, hücre kültürlerine dayanıklı, nöronal ve glial yönde farklılaşma gösteren, elde edilmesi kolay ve az maliyetli nöral kök hücre kaynağı oluşturulabileceği sonucuna ulaşıldı.