Seyhan nehri kıyısından izole edilen Bacillus sp.'den L-asparajinaz izolasyonu ve karakterizasyonu

L-asparajinaz terapötik özelliğiyle, tümör hücrelerinin özellikle akut lenfoblastik lösemi tedavilerinde kullanılabilir bir anti-tümör ajan olarak büyük ilgi çekmektedir. Ayrıca, L-asparajinaz nişastalı gıdalarda kanserojen olan akrilamitin gıda işleme yardımcısı olarak, seviyesini önemli ölçüde azaltabilmektedir. Bu çalışmada, Adana'da Seyhan nehri kıyısından alınmış toprak örneğinden 40 adet Bacillus suşu izole edilmiştir. Suşların L-asparajinaz üretim yeteneklerini saptamak amacıyla L-asparajin içeren modifiye M9 besiyeri kullanılmıştır. Enzim üretme yeteneğinde olan 4 suş saptanmış, bunlardan Z12 nolu suş hem kalitatif hem de kantitatif deneylerde en yüksek aktivite göstermiştir. Z12 nolu suş mikroskobik (Gram +, endospor + basil) ve biyokimyasal testler (VITEK-2, % 88) ile Bacillus olarak tanımlanmıştır. Optimum enzim üretimi; 0.75% L-asparajin ihtiva eden besiyerinde (pH 7.0) 5 gün ve 40°C'de gerçekleştirilmiştir. L-asparajinaz geniş pH ve sıcaklık aralığında aktivite göstermesine rağmen optimum aktivite pH 8.0 ve 40oC'de gözlenmiştir. Enzim farklı tamponlar (pH 7.0-12.0) ile 60 dk muamele edildiğinde pH 7.0'de aktivitenin %100 korunduğu gözlenmiştir. Değişen sıcaklılarda (40-100oC) 60 dk ön inkübasyondan sonra enzim 50oC'de aktivitesini %100 korumasına rağmen, 70oC'nin üzerindeki sıcaklıklarda aktivitesinin %50'sini kaybetmiştir. Üre ve EDTA enzim aktivitesini yaklaşık 50%'e kadar azaltmış, ancak, MgCl2 enzim aktivitesini %20 düzeyinde arttırmıştır. Zymogram ve SDS-PAGE analiziyle enzimin 128 kDa boyutunda tek bant olduğu gözlenmiştir. Sonuçlara göre, doğal bir izolat olan Bacillus Z12 suşu L-asparajinaz üreticisi olarak endüstriyel amaçlı kullanılabilir.