Karaca mersini(Acipenser gueldenstaedtii)solungacından karbonik anhidrazın karakterizasyonu

Bu çalışmada Karaca Mersini'nin (Acipenser gueldenstaedtii) dokularında karbonik anhidraz (CA) enzimi karakterize edildi. Balığın kalp, beyin, solungaç homojenatlarında ve eritrosit hemolizatında karbonik anhidrazın hidrataz aktivitesi sırasıyla 2,5, 7,4, 5,2, 10,8 EU/mg protein olarak belirlendi. Balığın solungacından karbonik anhidraz enzimi Sepharose-4B-L tirozin-sülfanilamid kolonunda 66 kat ve 20,7 verimle saflaştırılarak spesifik aktivitesi 222,2 EU/mg protein olarak tespit edildi.Enzimin saflığına sodyum dodesilsülfat poliakrilamid (SDS-PAGE) jel elektroforezinde gözlenen tek protein bandı ile karar verildi. SDS-PAG Elektroforezi sonucunda Karaca Mersini solungaçlarından saflaştırılan karbonik anhidrazın altbirim molekül kütlesi yaklaşık olarak 20 kDa olarak bulundu. Enzimin p-nitrofenil asetat substratı varlığında esteraz aktivitesinin pH 6,0'da ve 40 oC sıcaklıkta en yüksek olduğu tespit edildi. Solungaç karbonik anhidrazının Km ve Vmax kinetik değerlerini p-nitrofenol asetat (p-NFA) substratı kullanılarak Lineweaver-Burk grafiğinden hesaplandı ve KM 2,5 mM ve Vmaks 5x106 ? M/dak olarak belirlenmiştir. Enzimin p-NFA'a karşı etkinliğini belirten kcat değeri 134408,6 s-1 ile kcat/KM değeri 53763,4 mM-1s-1olarak bulundu. Solungaç CA'sının sülfanilamid ve asetazolamid inhibitörlerine karşı 13 ve 0,1 ? M gibi oldukça düşük IC50 değerine sahip olduğu tespit edildi. Ayrıca enzimin Zn+2 ile Ba+2 varlığında 1,1 mM, Fe+2 varlığında 0,2 mM, Co+2 varlığında 1,7 mM ve Ni +2 varlığında 1,2 mM IC50 değerleriyle inhibe olduğu belirlendi.Anahtar Kelimeler: Karbonik anhidraz, Karaca Mersini balığı, Acipenser gueldenstaedtii