Kuru fasulye (Phaseolus vulgaris L.) bitkisinden peroksidaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Peroksidazların çeşitli endüstriyel ve biyokimyasal alanlarda etkileri olduğundan saflaştırma ve karakterizasyon çalışmaları önem arzetmektedir. Bu çalışmada peroksidaz enzimi (POD) farklı tekniklerle kuru fasulye (Phaseolus vulgaris L.) bitkisinden saflaştırıldı, karakterize edildi, kinetik özellikleri belirlendi ve inhibisyon çalışması yapıldı. Fasulyedeki POD, (NH4)2SO4 çöktürme, diyaliz, CM-Sephadex ve jel filtrasyon kromatografileri kullanılarak saflaştırıldı. Saflaştırılan POD enziminin saflığını kontrol etmek ve molekül kütlesini belirlemek için SDS-PAGE yapıldı ve molekül kütlesi 45 kDa bulundu. Ham ekstredeki POD enzimi üzerine yapılan karakterizasyon çalışmalarında optimum pH, optimum iyonik şiddet, optimum sıcaklık ve stabil pH sırasıyla 5,0, 0.3 M, 30 ºC, 5,0 olarak tespit edildi. Km ve Vmax değerleri Linewear-Burk grafiği çizilerek hesaplandı. Guaiakol ve H2O2 substratları için enzimin Km değerleri sırasıyla 0,0154 ve 0,065 olarak belirlendi. POD enzimi üzerinde CTAB (setil trimetilamonyum bromür), EDTA(etilendiamintetra asetik asit), sitrik asit ve sodyum azidin inhibisyon etkisi incelendi ve en yüksek inhibisyon etkisi sodyum azidde (%99 inhibisyon) gözlendi.