Poli(vinilpirolidon-co-bütilakrilat-co-n-hidroksimetil akrilamit) terpolimeri üzerine invertaz enziminin immobilizasyonu

Bu çalışmada, Poli(VP-co-BAc-co-NHMAAm) terpolimeri üzerine invertaz enzimi hapsetme ve kovalent bağlanma yöntemleri ile immobilize edilmiştir. Hem serbest enzimin hem de her iki yöntemle immobilize edilen enzimin optimum sıcaklık ve pH değerleri, tekrar kullanılabilirlik, depolanma ömrü, kinetik parametreleri birlikte araştırılmıştır. Optimum sıcaklık serbest enzim için 50-55ºC olarak bulunurken, hapsetme yönteminde 70ºC ve kovalent bağlanma yönteminde ise 80ºC olduğu bulunmuştur. Ayrıca, immobilizasyon işleminin her iki yöntem için de termal kararlılığı arttırdığı tespit edilmiştir. Optimum pH değerinin serbest enzim ve hapsetme yöntemi için aynı olduğu ve bu değerin pH=5,0 olduğu bulunmuştur. Kovalent bağlanma yönteminde ise bu değer pH=7,0 olarak bulunmuştur. Her iki yöntemle immobilize edilen enzimin serbest enzime göre daha geniş bir pH çalışma aralığı sağladığı bulunmuştur. Her iki yöntemle immobilize edilen enzimlerin farklı periyotlarda tekrar kullanılabilirliğine bakılmıştır. İmmobilize edilen enzimin 60 defa tekrar kullanıldığı halde hala bir aktiviteye sahip olduğu gözlenmiştir. Kovalent bağlanma yönteminde 7 aylık bir depolanma sonucunda enzim başlangıç aktivitesinin %85'ini, hapsetme yönteminde ise %90'ını koruduğu bulunmuştur. Serbest enzim ise bu sürede aktivitesinin tamamını kaybetmiştir. Hem serbest enzim hem de her iki yöntemle immobilize edilen enzim için Km ve Vmaks değerleri belirlenmiş ve immobilize edilen enzimlerin serbest enzime oranla daha düşük Km değerlerine sahip oldukları gözlenmiştir. Anahtar Kelimeler: Vinil Pirolidon, Bütil Akrilat, N-hidroksimetil Akrilamit, terpolimer, hapsetme, kovalent bağlanma, invertaz, enzim immobilizasyonu.