Yeni nesil matriks üzerine metal şelat afinite etkileşimi ile katalazın tersinir immobilizasyonu

p(AAm-AGE) kriyojel, akrilamit ve allil glisidil eterin radikalik polimerizasyonu ile hazırlanmıştır. Cibacron Blue F3GA, p(AAm-AGE) kriyojel üzerine reaktif boyanın klor grupları ile allil glisidil eterin epoksit grupları arasındaki reaksiyon sonucu kovalent olarak bağlanmıştır. Cibacron Blue F3GA bağlanan p(AAm-AGE) kriyojel ile Fe(III) iyonları arasında şelat oluşturulmuştur. p(AAm-AGE)-CB-Fe(III) kriyojel, FTIR, SEM analizleri and şişme derecesinin belirlenmesi ile karakterize edilmiştir. 25,8µmol Fe(III) iyonları içeren IMAC kriyojel, farklı koşullarda (pH, başlangıç protein konsantrasyonu, sıcaklık, akış hızı ve iyonik şiddet) adsorpsiyon çalışmalarında kullanılmıştır. Maksimum adsorpsiyon kapasiteleri p(AAm-AGE)-CB ve p(AAm-AGE)-CB-Fe(III) kriyojelleri için sırayla 75,7 mg/g ve 60,6 mg/g olarak belirlenmiş ve g kriyojel başına adsorplanan miktar pH 6,0'da 1,5mg/mL derişimde doygunluk değerine ulaşmıştır. Michealis-Menten sabiti ve Vmax değerlerinin p(AAm-AGE)-CB-Fe(III) kriyojel üzerine katalaz adsorpsiyonuyla belirgin olarak değiştiği belirlenmiştir. Michealis-Menten sabiti serbest katalaz için 0,73 g/L, immoblize katalaz için 0,18 g/L olarak belirlenmiştir. Serbest enzymin Vmax değeri (2000 U/mg enzim) immobilize enziminkinden düşük (2500 U/mg enzim) bulunmuştur. İmmobilize katalazın serbest enzime göre daha geniş sıcaklık aralığında daha yüksek aktivite gösterdiği belirlenmiştir. Ayrıca, p(AAm-AGE)-CB-Fe(III) kriyojel üzerine enzimin defelarca adsorplanıp desorplanabildiği belirlenmiştir.