Sıçanlarda metotreksat kaynaklı testis hasarı üzerine mezenkimal kök hücrenin histopatolojik etkisi

Metotreksat (MTX) bir folik asit antagonisti, antiproliferatif, anti-inflamatuar ve immünomodülatör etkilere sahiptir. Akut lenfoblastik lösemi, non-hodgkin lenfoma, meme kanseri ve baş boyun kanserlerinin tedavisinde kullanıldığı gibi kanser olmayan hastalıklarda da (romatoid artrit) kullanılmaktadır. MTX neden olduğu oksidatif strese bağlı testiküler hasarı spermatojenik hücreleri ve sertoli hücreleri üzerinde olmaktadır. Aynı zamanda leydig hücrelerinde de fonksiyon bozukluğuna ve buna bağlı olarak testosteron seviyesinde azalmaya neden olmaktadır. Kemoterapotik ilaçların zararlı etkilerine çok duyarlı olan spermatojenik hücrelere verdiği zararlar sonucu MTX infertiliteye yol açabilecek ajanlar arasında belirtilmiştir. Kök hücreler, kendilerini yenileme, bir organizmanın yaşamı boyunca kaybolan hücrelerinin yerini yenisinin alması ve fonksiyonel olarak farklılaşmış hücreleri oluşturabilme kapasitesine sahip hücrelerdir. Her ne kadar kök hücrelerin kendini yenileyerek bölünmeleri ile sonsuz bölünebildikleri düşünülse de kök hücrelerin sonsuz çoğalabilme yeteneklerini gösteren çok az kanıt vardır. Kök hücreler vücutta, epitel yenilenmesi, hematopoez ve spermatogenez gibi rejenerasyona katkıda bulunurlar. Sıçan kemik iliğinde alınacak olan mezenkimal kaynaklı kök hücreler uygun ortamda pasaj 3'e getirilecek. Bu kök hücreler Red Fluorescent Proteinle (RFP) işaretlenecek. Kök hücreler RFP ile işaretlendiği için florasans mikroskop yardımı ile verdiğimiz kök hücrelerin testiste varlığı gösterilmiş olacak. Flow sitometrik, mezenkimal kök hücrelerin yüzey marker'ının ekspresyonu analiz etmek için CD 11b, CD 29, CD 45 ve CD 90 kullanılacaktır. Kemik iliğinden aldığımız kök hücreleri Flow sitometride CD 29 ve CD 90 markerları ile mezenkimal kök hücrenin pozitif ekspresyonu gösterilecektir. Hematopoetik belirteçlerden olan CD 45 ve CD 11b ile negatif ekspresyon olduğu gösterilecektir. Akciğer dokusunda flowsitometri ile CD 34 negatif olarak belirlenmesi ile kök hücrenin mezenkimal kaynaklı kök hücre olduğu belirlenecektir. Anahtar Kelimeler: Metotreaksat, Kök hücre, Testis