Irak'ta klinik kaynaklardan izole edilen Pseudomonas aerugınosa'da virülans faktörleri genleri ile quorum-sensıng arasındaki ilişkiyi incelemek

Pseudomonas aeruginosa, P. aeruginosa'ya bağlı olarak önemli oranda mortalite ve morbidite yaşayan, bağışıklık sistemi bozulmuş hastalardan hastaneye yatırılan fırsatçı bir bakteridir. Yüz yirmi farklı klinik örnek (yanık , yara sürüntü , kulak sürüntü ve balgam, idrar ve kan ) toplandı ve farklı besiyerlerinde kültürleri yapıldı. seçici besiyeri ve MacConkey agar besiyeri olarak, mikroskobik ve konvansiyonel biyokimyasal test, ardından teşhisin doğrulanması ve elde edilen izolatların biyotiplenmesi için VITEK 2 kompakt sisteminin ID GNB kartları. İzole edilen bakterilerin sonuçları, 120 örnekten40'ında (%33,3) P. aeruginos'un kaynağına göre değişen yüzdelerde pozitif sonuç verdiği; yanıklar 18(%45), yaralar 10(%33,3), Balgam 2 (%40), Göz sürüntüleri 2 (%40), Otitis media 5 (%20), İdrar 2 (%20), Kan 1 (%20). Bu çalışmada, P. aeruginosa'nın (40) lipaz, proteaz, hemolizin üretimi, motilite gibi farklı virülans faktörleri üretme yeteneği incelenmiştir. P. aeruginosa'nın 40 izolatından virülans faktörlerinin üretiminde değişkenlik, 37'si (%92,5) Lipaz, 35'i (%87,5) Proteaz, 34'ü (%85) Hemoliz ve 38'i (%95) hareketlilik göstermiştir. P. aeruginosa izolatlarının biyofilm oluşturup oluşturamayacağını belirlemek için mikrotiter plaka yöntemi (MTP) kullanılmış olup, sonuçlar 40 izolattan 39'unun (%33,3) biyofilm üreten bakteri olduğunu göstermiştir (Güçlü %75, orta %17,5, zayıf %5) ve yalnızca bir (%2,5) izolat biyofilm oluşturmamıştır. Kirby-Bauer Disk Difüzyon yöntemi kullanılarak 16 çeşit antibiyotik kullanılarak tüm P. aeruginosa izolatlarında antibiyotik duyarlılık testi yapılmıştır. Sonuçlar, izolatların çoğunun sunulan farklı antibiyotiklere (Ceftazidiame, Ceftriaxone, Cefepime, Gentamicin, Ciprofloxacin, Levofloxacin, Amikacin, Piparacillin, Netilmicin, Imipenem, Polymyxin B, Colistin, Aztreonam Streptomisin) farklı yüzdelerde (85,82.5,75,72.5, Sırasıyla %70,70,50,45,37,5,35,30%,27,5,22,5,17,5) iken, izolatlara karşı en etkili ajanların Piparasilin-tazobaktam (%2,5) ve Meropenem (%0) olduğu bulundu. Tüm izolatların moleküler tespiti, Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) tekniğine dayanan bazı virülans genlerini saptamak için spesifik primerler kullanılarak konvansiyonel PCR amplifikasyonu kullanılarak gerçekleştirildi. Bu teknik, 40 p.aeruginosa izolatının tamamına uygulandı ve sonuçlar izolatları gösterdi. apr A 6(%15), exo U 16 (%40), txo A 11(%27,5), exoS 18(%45) genlerine farklı oranlarda sahip oldukları ve en virülent izolatların en çok üretimde bulunduğu saptanmıştır. virülans faktörleri yanık örneklerinden, ardından yara örneklerinden alınmıştır. Quorum sensing (lasR , rhlR, rhll ) genleri her gen için spesifik primerler kullanılarak yapıldı ve elektroforez jeli kullanılarak PCR ürünü saptandı. Sonuçlar, 40 P. aeruginosa izolatının lasR 6(%15), rhlR 24(%60), rhll 37(%92,5) ve en yüksek poz veren en virülent izolatlar gibi farklı yüzdelerde genlere sahip olduğunu ortaya koymuştur. QS üretiminde yara numuneleri ve ardından yanık numuneleri kullanılmıştır. Seçilen izolatların (8 izolat) direnci, kullanılan farklı konsantrasyona ve kırılma noktasına göre gentamisin'e karşı MİK testi ile doğrulandı. Bu çalışmanın bulguları, bulanıklığın görülmediği en düşük inhibisyon konsantrasyonunu 62.5μg/ml konsantrasyonda iki izolatta gösterirken, altı izolat için en yüksek inhibisyon konsantrasyonunun 250μg/ml konsantrasyonda olduğunu ortaya koydu. Gentamisin ile tedavi edilen MİK sonuçlarına göre seçilen sekiz p izolatından. Güçlü biyofilm üretimi ve (lasR, rhlR, aprA, toxA) genleri için pozitif sonuçlar gösteren aeruginosa, her izolat, Asil homoserin laktonu saptamak için gentamisin (250 ,125) Mg\ml ve kontrol (antibiyotikle tedavi edilmeden) ile tedavi edilmiş olup (AHL) kolorimetrik yöntemle yapılmış sonuçlar, bu antibiyotiğin özellikle 250Mg\ml konsantrasyonundaki etkisini, kahverengi renk sarıya döndüğünde protein AHL molekülü üzerinde göstermiştir. Bu çalışma, klinik olarak seçilen P. aeruginosa izolatları (yara enfeksiyonundan) için bazı virülans faktörlerinin (aprA, toxA) üretiminde QS (lasR, rhlR) genlerinin rolünü incelenmiştir. Bulgular, eksprese edilen kontrol ile karşılaştırıldığında (antibiyotikle tedavi edildikten sonra) önemli ölçüde azalan bir QS genleri lasR ve rhl R'nin ekspresyonu ile ilişkili tox A geninin ekspresyonu için önemli etkiye işaret etmektedir. Apr A geninin transkripsiyonu, QS genlerinin ekspresyonu azaldığında artarken, bu, apr A transkripsiyonunda virülans faktör geni için oto-indükleyici sinyaller olarak bu gen için QS proteini ile ekspresyon ilişkisi olmadığını gösterir. P. aeruginos Patogenezinde QS sistemlerinin önemli rolü olan bir bakteridir ve ayrıca P. aeruginosa'nın bazı izolatlarda QS sistemindeki zayıflığa rağmen insanlarda klinik enfeksiyonlara neden olabildiğini göstermiştir