Sulu ikili faz sistemi ile Agaricus bisporus atıklarından lakkaz geri kazanımı

Lakkazlar (EC 1.10.3.2, benzendiol: oksijen oksidoredüktaz) fenolik bileşikleri fenoksil radikallere dönüştürebilme yeteneğine sahip olan çoklu-bakır proteinleridir. Lakkazlar 2,2'-azinobis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate) (ABTS) mediatörü gibi fenolik olmayan bileşikleri okside edebilme potansiyeline sahiptir. Lakkazlar, ilk defa bitkilerden izole edilmiş ancak mantarlarda ve bazı bakterilerde de bulunmuştur. Fungal lakkazlar, lignin parçalanması, sporulasyon, pigment üretimi, meyve oluşumu ve bitki patogenezi gibi süreçlere aracılık etmektedir. Lakkazların Agaricus bisporus atık mantar sapından salgılanan en önemli ligninolitik enzimlerin ilkidir. Bu çalışmada, Agaricus bisporus'un atık sap lakkazlarının geri kazanımı için düşük maliyetli sulu ikili faz sisteminin (ATPS) kullanımı araştırılmıştır. Sulu ikili faz sistemi tuz ve poli etilen glikol (PEG) polimerinden oluşmaktadır Sulu ikili faz sisteminde, PEG konsantrasyonu ve moleküler ağırlığı, tuz türü ve sistem pH parametreleri ile birlikte en iyi lakkaz konsantrasyonu belirlenerek enzim geri kazanımı sağlanmıştır. Çalışmamızda, lakkaz enzim kaynağı olarak Agaricus bisporus atık mantar sapı kullanılmıştır. %12.21 kuru madde olan atık mantar sapından elde ettiğimiz ham enzim ekstraktının protein miktarı 3.9 mg/ml ve spesifik aktivitesi 13.713 U/mg olarak saptanmıştır. Sulu ikili faz sistemi ile faz hacim oranı<1.0 olan en yüksek değerlerin alındığı pH 4.60'daki kombinasyon %10 PEG-1000 / %12.5 Na2SO4 / %1 ham enzim ekstraktı karışımıyla, enzimin protein miktarı 0.46 mg/ml aktivitesi 16.144 U/mg , saflaştırma katsayısı 1.20, enzim geri kazanımı %94.06 ve %86'lık verim ile saflaştırılmıştır. Ultrafiltrasyon sonucu protein miktarı 1.1 mg/ml aktivitesi 24.171 U/mg olduğu görülmüştür. Enzim başlangıç ham enzim ekstraktına göre 1.76 kat saflaştırılmıştır.