Theileria parva'nın laktat dehidrogenaz enzimini kodlayan genin izolasyonu, klonlanması ve ekspresyonu

Theileria parva, Şark sahili humması adı verilen (East Coast Fever, ECF), sığırlarda önemli ekonomik kayıplara neden olan kene kaynaklı bir hastalık etmenidir. ECF'nin tedavisinde kullanılan ilaçların maliyetlerinin yüksek olması, bu ilaçlardan bazılarına direnç geliştirildiğinin rapor edilmesi, parazite karşı etkili bir aşının bulunmaması hastalıkla mücadelede önemli bir problemdir. Bu nedenle etkili, ucuz ve güvenle kullanılabilecek yeni ilaçların geliştirilmesini sağlayacak, kemoterapötik hedeflerin araştırılması gerekmektedir.Theileria parva ihtiyaç duyduğu enerjiyi glikoliz ile sağlamaktadır. Glikoliz metabolizmasında önemli bir yere sahip olan enzimler, antiheileriallerin tasarımı için yeni hedef olabilirler. Laktat dehidrogenaz enzimi, parazitin glikoliz enzimleri arasında en yüksek aktiviteyi gösteren enzim olmasından dolayı terapötik hedef olarak seçilmiştir. Laktat dehidrogenaz enzimini kodlayan genin klonlanması standart metodlarla gerçekleştirilip, pGEM-T vektörüne aktarılmıştır. TpLDH geni 2 intron ve 3 ekson içerip, intronlarıyla beraber toplam 1353 baz çiftinden oluşmuştur. TpLDH geninin intronları yönlendirilmiş mutagenezle çıkarılıp, ekson fragmentleri PCR ile birleştirilmiştir. PCR ile gerçekleştirilen çalışmanın sonunda, TpLDH geni intronsuz, 966 baz çifti uzunluğunda, ekspresyona hazır halde elde edilmiştir.Anahtar Kelimeler: Theileria parva, Apikompleksan, Laktat dehidrogenaz, Antitheilerial, Kemoterapötik Hedef