Vulpinik asitle farklı kemoterapotik ilaçların meme kanseri hücre hatları üzerinde sinerjik antikanser etkilerinin gen ve protein seviyesinde araştırılması

Bu tez çalışmasında vulpinik asit ile farklı kemoterapötik ilaçların (sisplatin, dosetaksel, doksorubisin ve mitoksantron) insan meme kanseri hücre hatları (MCF-7, MDA-MB-231 ve MDA-MB-453) üzerindeki sinerjik antikanser etkilerinin gen ve protein seviyelerinde araştırılması amaçlanmıştır. Bu doğrultuda, ilk aşamada vulpinik asit ile her bir kemoterapötik ilacın yukarıda bahsi geçen hücre hatları üzerindeki sitotoksik etkileri doz ve zaman bağımlı olarak XTT yöntemiyle incelendi ve buradan elde edilen absorbans değerleri CompSyn programına işlenerek vulpink asidin her bir kemoterapötik ilaç ile kombinasyon indeks (CI) değeri belirlendi. CI değerleri, vulpinik asidin doksorubisin ve mitoksantron ile MDA-MB-231 ve MDA-MB-453 hücreleri üzerinde sinerjik etki, MCF-7 hücrelerinde ise antagonist etki sergilediğini gösterdi. İkinci aşamada, sinerjik etki görülen hücre hatlarındaki ROS miktarı, mitokondriyal membran potansiyeli, multikaspaz aktivitesi, hücre döngüsü, apoptosis ve PI3K/AKT sinyal yolağındaki değişimler flow sitometrik analizler ile incelendi. Sonuçlar, her iki hücre hattında da ROS miktarında, mitokondriyal membrane depolarizasyonunda ve multikaspaz aktivitesinde artış olduğunu, hücre döngülerini G0/G1 fazında yakaladığını, hücreleri apotoza yönlendirdiğini ve ayrıca PI3K/AKT sinyal yolağını bloke ettiğini gösterdi. Üçüncü aşamada, flow sitometri analiz sonuçlarını moleküler seviyede doğrulamak için apoptotik yolak markır proteinleri BAX, BCL2, P53, Kaspaz-3, Kleaved kaspaz-3, Sitokrom-c'nin, ve PI3K/AKT sinyal yolağının markır proteinleri olan PI3K, mTOR ve AKT'nin protein ve gen seviyelerindeki kantitatif değişimleri Western blot ve Real Time PCR (qPCR) analizleri ile incelendi. Elde edilen veriler hücrelerde apoptotik etkilerin hem gen hem de protein seviyesinde gerçekleştiğini, PI3K/AKT sinyal yolağındaki baskılanmanın ise protein seviyesinde olduğunu gösterdi. Son aşamada, yara iyileştirme yöntemiyle gerçekleştirilen migrasyon testleri sonucunda her iki hücre hattında da uygulanan kombinasyonların önemli derecede antimigratif etki sergilediğini göstermiştir. Sonuç olarak, tüm bu veriler vulpinik asit ile doksorubisin ve mitoksantron'un meme kanseri hücre hatlarında in vitro sinerjik etki gösteren kombinasyonlarının meme kanseri tedavisinde bir sonraki aşama olan in vivo çalışmalara kapı aralamıştır.