Balık yemi katkısı β-glukanaz enzimleri üreten rekombinant Bacillus subtilis suşlarının geliştirilmesi

Yapılan bu tez çalışması ile rekombinant Escherichia coli bakterisinden β-(1,3)-glukanaz genini taşıyan pRS416G vektörü izole edilmiş ve elektrotransformasyon tekniği kullanılarak Bacillus subtilis BR151 suşuna aktarılmıştır. Elektrotransformasyon sonucunda bu bakterilerin laminarin içeren plaklarda rekombinant koloni oluşturdukları gözlemlenmiştir. Rekombinant kolonilerin Congo-red boyaması sonucunda pozitif zon oluşturması ile de üretilen proteinin aktif olduğu anlaşılmıştır. SDS-PAGE ve zymogram analizlerinde ise β-(1,3)-glukanaz enziminden sorumlu 125 kDa büyüklüğündeki protein bandı gösterilmiştir. Diğer taraftan, β-(1,3-1,4)-glukanaz genini taşıyan rekombinant pNW33N/β-(1,3-1,4)-glukanaz plazmid DNA'sı, elektrotransformasyon tekniği kullanılarak Bacillus subtilis RSKK245 suşuna aktarılmıştır. Rekombinant B. subtilis RSKK245 kolonilerinin etrafındaki enzimatik aktivite bölgeleri Congo-red ile boyanarak gösterilmiştir. Enzime ait 26 kDa büyüklüğündeki protein bandı ise zymogram analizi ile gösterilmiştir. Elde edilen bu sonuçlar klonlanan genlerin başarıyla eksprese edildiğini göstermektedir.