Romatoid artrit tedavisine yönelik protein A- takılı poli(HEMA) kriyojellerin hazırlanması

Romatoid artrit (RA) vücudun kendi bağışıklık sisteminin sağlıklı hücrelere saldırdığı bir otoimmün bozukluktur. Dünya nüfusunun %1-3' ünde RA görülmektedir. Son yıllarda RA hastaları için tedavi yöntemlerinde oldukça yol katedilmiştir. Bu yöntemlerden biri olan immünoadsorpsiyon yöntemi ile, plazmadan sadece patojen antikorlar uzaklaştırılmaktadır. Ligand olarak Staphylococcal Protein A ile afinite kromatografi uygulamaları, antikor saflaştırılmasında yaygın olarak kullanılmaktadır. Protein A, antikorların Fc kısımlarına spesifik olarak bağlanan bir proteindir.Sunulan çalışmada, RA tedavisine yönelik protein A takılı-Poli(2-hidroksietil metakrilat) kriyojel hazırlanmıştır. İlk basamakta yığın polimerizasyon tekniği ile plastik şırıngada monomerin sulu çözeltide donmasıyla (donmuş-polimerizasyon) Poli(HEMA) kriyojel hazırlanmıştır. Buz eridikten sonra Poli(HEMA) kriyojelinde 10-200 µm gözenek boyutunda birbiriyle bağlantılı makrogözenekler oluşturulmuştur. Daha sonra CNBr ile aktive edilip spesifik ligand olarak protein A bağlanmıştır. Hazırlanan protein A takılı-Poli(HEMA) kriyojel yüzey alan ölçümleri, şişme testleri, taramalı elektron mikroskobu (SEM) ve FTIR ile karakterize edilmiştir. Protein A takılı-poli (HEMA) kriyojelinde maksimum immünoglobülin G (IgG) adsorpsiyonu pH 7.4' te 83.2 mg/g olarak bulunmuştur. İnsan plazmasından adsorpsiyon incelendiğinde ise daha da yüksek adsorpsiyon kapasitesi elde edilmiştir (98.7 mg/g). Poli(HEMA) kriyojelin spesifik olmayan IgG adsorpsiyonu ise 0.38 mg/g olarak belirlenmiştir. Adsorbe olan IgG 0.1 M Glisin-HCl (pH 3.5) tamponuyla % 85 saflıkta elüe edilmiştir. Sıcaklık deneylerinde 37°C' de maksimum IgG adsorpsiyon kapasitesi (98.8 mg/g) gözlenmiştir.İmmobilize edilen protein A miktarı artıkça adsorplanan romatoid faktörün de artığı gözlenmiştir. İnsan Serum Albumin (HSA) ve IgG protein karışımı ile insan plazması için hesaplanan RS değerleri sırasıyla 2.28 ve 2.63 olarak bulunmuştur.Kan uyuşabilirlik çalışmalarında pıhtılaşma zamanı (CT), aktive kısmi tromboplastin zamanı (APTT), protrombin zamanı (PT) ve fibrinojen zamanı (FT) tayin edilmiş, protein A takılı-Poli (HEMA) kriyojellere ait bütün pıhtılaşma zamanlarının poli (HEMA) kriyojele göre arttığı gözlenmiştir.Protein A takılı- Poli(HEMA) kriyojel ile 10 kez adsorpsiyon/desorpsiyon yapıldığında IgG adsorpsiyon kapasitesinde belirli bir azalma olmadan tekrar kullanılabilir olduğu görülmüştür.