Aspergillus yönünden pozitif olan sinozal mukoza ve polip örneklerinde miR-628-3p ve miR-4455 ifade seviyelerinin moleküler yöntem ile araştırılması

Aspergillus türleri, insan sağlığı üzerinde önemli etkiler yaratabilen, küf mantarları sınıfına ait mikroorganizmalardır. Aspergillus türlerinin sinozal mukoza ve polip örneklerinde varlığı, özellikle kronik sinüzit gibi hastalıkların patogenezi ile ilişkilidir. Çalışmada amaç özellikle Aspergillus türlerinin sinüs poliplerinde ve mukoza dokusunda nasıl birikim sağladığını, bu mantarların hastalık gelişimindeki rollerini miR-628-3p ve miR-4455 ifade düzeyleri ile nasıl etkileşimde bulunduğunu moleküler yöntemler kullanarak göstermektir. Çalışmada, T.C. Malatya İnönü Üniversitesi Turgut Özal Tıp Fakültesi Kulak, Burun ve Boğaz Polikliniği'ne başvuran Ekim 2024-Aralık 2024 tarihleri arasında, nazal polip tanısı alan 45 hastanın dokuları değerlendirmeye alındı. Çalışmada örnekler mikolojik ve moleküler testlerde olmak üzere ikiye ayrıldı Örneklerin bir kısmı %10 potasyum hidroksit (KOH) kullanılarak ışık mikroskobu altında incelendi, bir kısmı ise Sabouraud dekstroz agarda (Merk, Darmstadt, Almanya) 14 gün boyunca 30°C'de kültürleri yapıldı. Örneklerin Ekstraksiyon için, üreticinin önerilerine göre bir DNA ekstraksiyon kiti (Invetech, Berlin, Almanya) kullanıldı. Daha sonra Aspergillus pozitif örneklerden miR-4455 ve miR-628-3p seviyelerine bakıldı. Önce Trizol ile RNA izolasyosu yapıldı. RNA izolasyonu sonucunun kalite kontrolü ise 3.5 μL RedSafe içeren % 1'lik agaroz jelde yürütüldü. Bantlar SYNGENE G-BOX ChemiXRQ UV jel görüntüleme sistemi ile görüntülenip RNA'ların degredasyon durumları kontrol edildi. RNA molekülerinin miktarı ve verimi Qubi̇t HS RNA Assay Kit (Katalog No: Q32852, Q32855) kullanılarak Qubit Florometre cihazında ölçümleri yapıldı. Uygun kalitedeki RNA örneklerinden ABScript III RT Master Mix for qPZR (RK20428) ile cDNA sentezi yapıldı. Sentezlenen cDNA örnekleri ile Applied Biosystem Step One Plus Real-Time cihazında PZR reaksiyonu gerçekleştirildi. cDNA sentezi yapıldıktan sonra miR-4455 ve miR-628-3p ifade düzeylerinin belirlenmesi için qRT-PZR reaksiyonu kuruldu. Veriler gruplar arasındaki farklılıkları ortaya koymak için qRT-PZR sonucunda elde edilen sonuçlar DataAssist v3.01 programında analiz edildi. Sonuçta Aspergillus pozitif örneklerde miR-4455'in kontrol grubuna kıyasla daha yüksek ekspresyonu, miR-628-3p'nin daha düşük fold change değeri ile azalışı görülmüştür. Özellikle miR-628-3p'de kontrol ve polip örneklerinin ifade düzeyi miR-4455'e kıyasla daha düşük seviyede olduğu görülmüştür. MiR-4455'in daha fazla artmış ekspresyonu, bu miRNA'nın polip oluşumuna katkıda bulunabileceği ya da inflamatuar süreçlerde önemli bir rol oynayabileceğini göstermektedir. MiR-628-3p, benzer şekilde ekspresyonu ile bu sürece dahil olabilir, ancak etkisi miR-4455'e kıyasla daha sınırlı olabilir.