Bacillus subtilis'te üreme plazmid ve amilaz sekresyonu üzerine kalsiyum kanal blokörlerinin ve ağır metallerin etkisi

Özet Bu çalışmada Nottingham Üniversitesi Tıp Fakültesi Mikrobiyoloji Bölümü'nden ve Ankara Üniversitesi Ziraat Fakültesi Gıda Mühendisliği Bölümü'nden temin edilen B. subtilis kullanıldı. Bakterilerin Nutrient Broth (NB) ve Starch Beef (SB) ortamında daha iyi üreme gösterdiği saptanarak, bu besi ortamlarında a-amilaz sekresyonunun hangi sürede maksimuma ulaştığı aktivite tayin yöntemi ile tespit edilip elektroforez ile teyit edildi. Bakteri, SB sıvı besi yerinde çeşitli kalsiyum kanal blokörleri ile kontrol eşliğinde etkileştirilerek, bu blokörlerin, üreme, a-amilaz üretimi ve bakteri plazmitleri üzerine etkileri araştırıldı. Blokörlerin üreme ve a-amilaz sekresyonunu inhibe ettiği saptandı. Kalsiyum kanal blokörlerinin a-amilaz enzimi üzerine in vitro etkisinin olmadığı gözlendi. Bakteri, SB sıvı besi yerinde ağır metaller ile beraber kalsiyum kanal blokörü olan Diltiazem ile kontrol eşliğinde etkileştirilerek, üreme, a-amilaz üretimi ve bakteri plazmitleri üzerine etkileri araştırıldı. HgCk'nin üreme ve a-amilaz sekresyonunu inhibe ettiği saptandı. ZnC^'nin üreme ve amilaz sekresyonu üzerinde etkili olmadığı, Diltiazem' in yalmz başına plazmit üzerine bir etkisinin olmadığı, ancak her iki ağır metalin Diltiazem eşliğinde plazmit amplifikasyonuna neden olduğu saptandı. NB sıvı besi yerinde bakteri üretiminin belirlenen zaman diliminde ortama ilave edilen Chloramphenicol ile protein sentezi durdurularak, membrandaki ve salgılanmış enzim aktivitelerine göre a-amilazm sentez ve olgun hale geliş süreleri belirlendi. İnhibisyonun tamamlanıp ribozom üzerinden membrandan çıkış süresi 70-80 dakika olarak tespit edildi. pH etkisine maruz bırakılan nötral proteaz enziminin, aktivitesinde meydana gelen değişiklikler belirlendi. Enzimin maksimum aktiviteyi pH 7'de gösterdiği ve ı/y dializ ile prostetik grubu olan Zn 'nin enzimden ayrılmadığı saptandı. Optimal dışındaki pH'larda enzimin üç boyutlu yapısının pH'ya bağımlı bozulması ile aktivitesini kaybettiği saptandı.