Bacillus subtilis'ten izole edilen alfa-amilazın aktivitesi üzerine (H+) etkisi

Bacillus subtilis 'ten izole edilen a-amilazın aktivitesi üzerine [H+] iyonlarının etkisi araştırıldı. Bu amaçla öncellikle enzim derişimi ve uygun inkübasyon süresi belirlenmeye çalışıldı. Sonuçta uygun enzim derişiminin 3.1 0-3 u.g/uL ve uygun inkübasyon süresinin 15 dakika olduğu saptandı. Uygun enzim derişiminde farklı pH'larda ve farklı substrat derişimlerinde her biri için ayrı ayrı olmak üzere enzim ön inkübasyonsuz ve enzim her bir pH'da tamponla 120 dakikalık ön inkübasyonundan sonra optimal pH değerleri tayin edildi. Her iki koşulda da optimal pH'nın 7.12 olduğu saptandı. Enzim stabilitesi üzerine pH'nın etkisini incelemek üzere enzim, sabit substrat derişiminde ([S]: 2.52 u.g/uL) daha önce saptanan optimal pH'da 120 dakikalık ön inkübasyona tabi tutuldu. pHı=pKa=6.15 ve pH2=pKb=8.68 ve optimal pH=7.415 olarak bulundu. Farklı pH'larda Michaelis-Menten kinetiği çalışılarak enzim için Km değerleri (4.898; 4.7311; 5.004; 1.4615; 0.2483; 1.6666 ug/uL) ve Vmax değerleri (2.023; 2.43 1; 2.542; 0.952; 0.1 17; 0.438 umol/dak.) bulundu. Oligomerik yapıdaki enzimlerin makromoleküler yapıdaki substratlarla Tippon, Dixon ve Webb teorilerini doğrulamakta uygun modeller olmadıkları kanısını uyandırdı.