Bazı alabalık işletmelerindeki yavru gökkuşağı alabalığında (Oncorhynchus mykiss Walbaum, 1792) Flavobacterum psychrophilum bakterisinin belirlenmesi, fenotipik ve genotipik özelliklerinin araştırılması

Bu çalışma ile Elazığ ili Keban ilçesinde bulunan dört ayrı Gökkuşağı alabalığı (Oncorhynchus mykiss Walbaum, 1792) işletmesindeki yavrularda Flavobacterium psychrophilum bakterisinin varlığı ile fenotipik ve genotipik özelliklerinin araştırılması hedeflendi. Bu amaçla, Aralık 2008 ve Temmuz 2009 tarihleri arasında alabalık işletmelerinden yumurta, döllenmiş yumurta, ovaryum sıvısı, sperm, gözlenmiş yumurta, keseli yavru, 5 gramdan küçük yavru, 5 gramdan büyük yavru, su ve yem örnekleri alındı.F. pyschrophilum izolasyonu için; Cytophaga Agar (CA), Cytophaga Broth (CB), Modified Anacker ve Ordal Agar (MAOA), Modified Anacker ve Ordal Broth (MAOB), Tryptone Yeast Extract Salt Agar (TYES-A), Tryptone Yeast Extract Salt Broth (TYES-B), Enriched Anacker ve Ordal + Fetal Bovine Serum+ Agar (EAO+FBS+A), Enriched Anacker ve Ordal + Fetal Bovine Serum + Broth (EAO+FBS+ B), Tryptone Yeast Salt Agar + Tobramycin (TYESA+ T) Tryptone Yeast Extract Fetal Bovine Serum (TYFBS) agarlar kullanıldı. Bu besiyerleri 15 oC'de 5?7 gün süreyle etüvde inkübe edildi. Üreyen saf sarı renkteki kolonilerin fenotipik özellikleri belirlendi. Ayrıca antibiyoğram duyarlılık testi disk difüzyon yöntemine göre yapıldı.İşletmelerden alınan 175 adet yumurta, 185 adet ovaryum sıvısı (2 ml'lik), 200 adet sperm (2 ml'lik) 185 adet povidin/iodin solüsyonuyla yıkanmış yumurta, 205 adet döllenmiş yumurta, 240 adet gözlenmiş yumurta, 510 adet keseli yavru, 400 adet 5 gramdan küçük yavru, 200 adet 5 gramdan büyük sağlıklı yavru alabalık dalağı, 200 adet 5 gramdan büyük sağlıklı yavru alabalık karaciğeri, 200 adet 5 gramdan büyük sağlıklı yavru alabalık böbreği, 200 adet 5 gramdan büyük sağlıklı yavru alabalık bağırsağı, 200 adet hastalıktan şüpheli ve yeni ölmüş yavru alabalık dalağı, 200 adet hastalıktan şüpheli ve yeni ölmüş yavru alabalık karaciğeri, 200 adet hastalıktan şüpheli ve yeni ölmüş yavru alabalık böbreği, 200 adet hastalıktan şüpheli ve yeni ölmüş yavru alabalık bağırsağı 120 adet yem ve 204 adet su örneği olmak üzere toplam 4024 adet örnek bakteriyolojik olarak incelendi. Bu örneklerde 160 adet (% 3,97) F. psychrophilum izole edildi. Bu suşların 18'i (% 10,28) yumurtadan, 13'ü (% 7,02) ovaryum sıvısından, 6'ı (% 3,24) povidin/iodin solüsyonuyla yıkanmış yumurtadan, 14'ü (% 6,82) döllenmiş yumurtadan, 14'ü (% 7,77) gözlenmiş yumurtadan, 13'ü (% 2,54) keseli yavrudan ve 15'i ise (% 3,75) 5 gramdan küçük yavrulardan izole edildi. Beş gramdan büyük sağlıklı yavruların dalağından 8 adet (% 4), karaciğerinden 5 adet (% 2,5), böbreğinden 4 adet (% 2) ve bağırsağından 1 adet (% 0,5) F. psychrophilum'un izolasyonu yapıldı. Yine 5 gramdan büyük hastalıktan şüpheli veya yeni ölmüş alabalık dalağından 17 adet (% 8,5), karaciğerinden 10 adet (% 5), böbreğinden 10 adet (% 5), bağırsağından 6 adet (% 3) ve işletmedeki sudan da 6 adet (% 2,94) F. psychrophilum izolasyon ve identifikasyonu yapıldı.Fenotipik ve biyokimyasal özellikler göre belirlenen 160 adet F. pyschrophilum suşunun Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR) tekniğiyle doğrulanmasında iki farklı primer kullanıldı. Akabinde bu suşların tamamının moleküler olarak F.pyschrophilum olduğu teyit edildi.Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR) ile doğrulanan suşların Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) tekniği ile gen tiplendirmesi yapıldı. Bunun sonucunda dört ayrı yavru alabalık işletmesinden izole edilen suşların referans F. psychrophilum NCIMB 1947T ile yakın akraba olduğu tespit edildi.Antibiyotik disk sonuçlarına göre, F. psychrophilum suşları; Amoksisilin, Amoksisilin/Klavulanik asit, Amikasin, Ampisilin, Kloramfenikol, Sefazolin, Enoksasin, Optokin, Neomisin, Vankomisin, Sefoksitin, Nalidiksik Asit, Aztreonam, Linkomisin ve Trimetoprim (% 100); Penisilin ve Klindamisin (% 78,12); Ofloksasin ve Gentamisin (% 78,75); Eritromisin ve Sulfametoksazol (% 55,62) ile Furazolidone (% 15,62) gibi antibiyotiklere karşı direnç gösterdiği görüldü. F. psychrophilum; Eritromisin ve Sulfametoksazol (% 28,12); İmipenem (% 21,87); Nitrofurantin, Tobramisin ve Netilmisin (% 21,25); Seftriakson, Sefoperazon, Klaritromisin, Piperasillin, Basitrasin ve Trimetoprim + Sulfametoksazol (% 16,25); Penisilin ve Klindamisin (% 12,50) gibi antibiyotiklere de orta derecede duyarlı olduğu tespit edildi. Yine F. psychrophilum; Oksitetrasiklin, Florfenikol, Enrofloksasin ve Siprofloksasin (% 100) ile Furazolidone (% 84,37); Trimetoprim + Sulfametoksazol, Seftriakson, Sefoperazon, Klaritromisin ve Piperasilin (% 83,75); Tobramisin, Nitrofurantoin ve Netilmisin (% 78,75); İmipenem % 78,12; Streptomisin (% 77,5); Ofloksasin (% 21,25); Eritromisin ve Sulfametoksazol (% 16,25); Penisilin ve Klindamisin (% 9,37) antibiyotiklerine ise duyarlı olduğu belirlendi.Sonuç olarak bu çalışmada, Elazığ ili Keban ilçesindeki dört farklı işletmede F. psychrophilum etkenini taşıdığı tespit edildi. F. psychrophilum kültür yöntemiyle identifikasyonu 3 hafta sürerken, Polimeraz Zincir Reaksiyon tekniği ile 24 saat içerisinde yapıldı. Pulsed Field Gel Electrophoresis tekniği ile F. psychrophilum'un alt tiplendirilmesi başarılı bir şekilde gerçekleştirildi. Ancak F. psychrophilum'a bağlı enfeksiyon ve salgınların epidemiyolojisi daha iyi anlaşılması için Türkiye'nin farklı bölgelerinde izole edilen suşlar kullanılarak daha detaylı bilgi sağlanacağı düşünülmektedir.