Çift-tabakalı baskılanmış kriyojeller: insan serumundan HSA molekülünün uzaklaştırılması

İnsan Serum Albümini (HSA) insan kanında en bol bulunan serum proteinidir, serum proteinlerinin yaklaşık yarısını oluşturur. Kan plazmasının proteomik çalışmalarında, albümin ve hemoglobin gibi kanda bol miktarda bulunan proteinler, düşük miktarda bulunan ve hastalıkların teşhisi ile ilgili olabilecek proteinlerin analizini zorlaştırmaktadır. Bu yüzden, bu proteinlerin uzaklaştırılması veya azaltılması proteomik çalışmalar için hayati öneme sahiptir. Bu tez çalışmasında, çift-tabakalı baskılanmış kriyojeller kullanılarak HSA'nın direkt olarak insan serumundan tek adımda azaltılması amaçlanmıştır. Çalışma kapsamında, ilk olarak HSA-baskılanmış kriyojeller %8 monomer konsantrasyonu ile sentezlenmiştir. Daha sonra, %8'lik kriyojel üzerine HSA içeren %16'lık polimer çözeltisi dökülerek, ilk kriyojel tabakasının birbirleriyle bağlantılı makrogözenekleri arasında ikinci polimer çözeltisinin jelleşmesi sağlanmıştır. Böylelikle, HSA-baskılanmış çift tabakalı polimerler (HSA-DIP) elde edilmiştir. Kontrol grubu olarak, çift-tabakalı baskılama tekniği ile üretilmiş fakat kalıp molekül içermeyen polimerler (DL-NIP) ve farklı monomer konsantrasyonlarında üretilmiş tek tabakalı HSA-spesifik polimerler (%8 ve %16 monomer konsantrasyonu için sırasıyla; HSA-MIP8% ve HSA-MIP16%) sentezlenmiş ve elde edilen sonuçlar birbirleriyle karşılaştırılmıştır. Sentezlenen kriyojel kolonları şişme testleri, Taramalı Elektron Mikroskobu (SEM) ve Mikro Bilgisayarlı Tomografi (Mikro-CT) analizi ile karakterize edilmiştir. Sonrasında, HSA tanıma bölgeleriyle ilişkili olarak HSA'nın sulu çözeltilerden adsorpsiyonu incelenmiştir. Ayrıca, HSA-DIP kolonlarının HSA molekülü için seçiciliği İnsan Hemoglobin (Hb) ve İmmünoglobulin G (IgG) yarışmacı moleküllerine karşı test edilmiştir. Elde edilen sonuçlar, sistemin adsorpsiyon özelliklerini belirlemek için kinetik analizlerle incelenmiştir. Son olarak, doğrudan insan serumundan HSA'nın azaltılması incelenmiştir. Ayrıca, çift-tabakalı baskılanmış polimerler yeniden kullanılabilirlik çalışmaları ile test edilmiş ve 10 adsorpsiyon-desorpsiyon döngüsünden sonra bile HSA-DIP kolonlarının HSA adsorpsiyon kapasitelerini önemli ölçüde koruduğu sonucuna ulaşılmıştır.