Feruloil esteraz enziminin kalsiyum aljinat içerisinde immobilizasyonu ve karakterizasyonu

Enzimler, canlıların yaşamını sürdürmede önemli biyokatalizörlerdir ve endüstride birçok alanda yaygın olarak kullanılmaktadır. Enzimlerin geri kazanımı ve yeniden kullanılabilirliği için enzim immobilizasyonu yapılmaktadır. Bu çalışmada, rekombine feruloil esteraz (FAE) enziminin tutuklama yöntemi ile kalsiyum aljinat içerisinde immobilizasyonu uygulanmıştır. Serbest ve immobilize feruloil esterazın optimum koşulları belirlenmiştir. Bu koşullar pH, sıcaklık, kinetik parametreler, termal ve depolama kararlılıkları ile immobilize feruloil esterazın tekrar kullanım kararlılığıdır. Serbest ve immobilize feruloil esterazın optimum pH'ları sırayla 8.0 ve 7.5, optimum sıcaklıkları ise her ikisi için de 40 °C olarak belirlenmiştir. Serbest ve immobilize feruloil esterazın depolama kararlılıkları 15 gün boyunca belirli zaman aralıklarında incelenmiştir. Serbest feruloil esteraz 5°C'de 15 gün sonunda başlangıç aktivitesinin %86'sını korurken, 25°C'de aktivitesinin %49'unu korumuştur. İmmobilize feruloil esteraz 5°C'de 7 gün sonunda başlangıç aktivitesinin %16'sını ve 25°C'de 3 gün sonunda aktivitesinin %4'ünü koruduğu gözlenmiştir. Serbest feruloil esterazın Km değeri 68.15 mM, Vmax değeri 2.86 U/mg protein, immobilize feruloil esterazın Km değeri 34.96 mM, Vmax değeri 21.79 U/mg protein olarak hesaplanmıştır. Serbest ve immobilize feruloil esterazın farklı sıcaklıklarda termal kararlılıkları belirlenmiştir. Serbest feruloil esteraz 40°C'de 16 saat sonunda başlangıç aktivitesinin %96'sını , 50°C'de ise %22'sini, immobilize feruloil esteraz başlangıç aktivitesinin 40°C'de %47'sini, 50ºC'de ise %31'ini koruduğu tespit edilmiştir. İmmobilize feruloil esterazın tekrar kullanılabilirliği araştırılmış ve 4. kullanımdan sonra aktivitesini %57 oranında koruduğu gözlenmiştir. Sonuç olarak kalsiyum aljinatın feruloil esterazlar için uygun bir immobilizasyon yöntemi olduğu tespit edilmiştir. Anahtar Kelimeler: Feruloil esteraz, İmmobilizasyon, Kalsiyum aljinat