Hypericum triquetrifolium Turra.'nın kallus ve hücre süspansiyon kültürlerinde total hiperisin içeriğinin belirlenmesi

Bu çalışmanın amacı, Hypericum triquetrifolium Turra.'nın in vitro kallus ve hücre süspansiyon kültürlerinden toplam hiperisin üretimini arttırmak için etkili bir süspansiyon kültürü yöntemi geliştirmektir. Kallus ve süspansiyon kültürlerinin paketlenmiş hücre hacmi, taze ağırlık ve kuru ağırlıkları gibi büyüme parametreleri ölçülmüştür. Süspansiyon kültürlerinin gelişmesi üzerine bitki büyüme düzenleyicilerinin etkileri özellikle çalışılmıştır.İlk olarak kallus kültürü çalışmalarında ana materyal olarak kullanılacak olan en uygun eksplantın (bitki parçası) tespiti için; doğal yetişme ortamından toplanan H. triquetrifolium'un yaprak, çiçek, gövde ve kök kısımlarının total hiperisin içerikleri araştırılmıştır. En yüksek total hiperisin içeriği bitkinin yaprak kısmından elde edilirken (1.95 ± 0.0027 mg/g) en düşük hiperisin içeriği de köklerden elde edilmiştir (0.08 ± 0.0015 mg/g). Daha yüksek total hiperisin içeren yaprak parçalarından kallus oluşturmak için çeşitli hormon kombinasyonları çalışıldı. En uygun kallus oluşum oranı (% 92.3) 1 mg/l BA + 2 mg/l NAA içeren MS besi ortamından elde edildi. Bu ortamdan elde edilen kalluslar, hücre süspansiyon kültürlerinin başlatılmasında ana materyal olarak kullanıldı.Kalluslar, 1 mg/l BA + 2 mg/l NAA içeren sıvı MS ortamına alınarak süspansiyon çalışmaları başlatıldı. Hücrelerin birbirinden ayrılmasının sağlamak için süspansiyon kültürü ortamı sırasıyla 500 µm, 250 µm ve 100 µm por çapındaki süzgeçlerden geçirildi. Süspansiyon kültürlerinin büyüme parametrelerinin araştırılması için iki farklı hormon kombinasyonu kullanıldı. 1 mg/l BA+ 2 mg/l NAA içeren MS besin ortamında gelişen hücreler, kültürün 20. gününde en yüksek büyüme oranı seviyesine ulaştı, paketlenmiş hücre hacmi (PHH) 2.33 kat, yaş ağırlık 5.5 kat ve kuru ağırlık 6.30 kat artış gösterdi. 1 mg/l BA + 0.4 mg/l 2,4-D içeren MS besin ortamında gelişen hücrelerin büyüme parametreleri 1 mg/l BA + 2 mg/l NAA ortamına paralel bir artış gösterdi.H. triquetrifolium'un in vitro kültürlerinden elde edilen total hiperisin içerikleri (0.0018 ± 0.00026 mg/g) doğada yetişen bitkilerin yapraklarından (1.95 ± 0.0027 mg/g) çok daha düşük olmasına rağmen, in vitro adapte edilmiş kültürlerin hiperisin üretmeleri bu tür çalışmaların ümitvar bir sistem olduğunu göstermektedir.Anahtar kelimeler: Hypericum triquetrifolium Turra., Hiperisin, Kallus kültürü, Süspansiyon kültürü, UV -Spektrofotometresi.