İnek sütünden izole edilen Bacillus sp.'den pullulanaz ve alfa-amilaz enzimlerinin üretimi, bu enzimlerin bazı optimizasyon koşullarının belirlenmesi

Günümüz biyoteknolojisinde enzimlerin kullanımı giderek önem kazanmaktadır.Bu enzimlerden -amilaz ve pullulanaz önemli biyoteknolojik enzimler arasındadır. -Amilazlar ve pullulanazlar, nisastanın hidrolizi için gıda, deterjan, tekstil, kagıt, bira vealkol gibi endüstriyel alanlarda kullanılmaktadır.Çalısmada öncelikle sütten izole edilen ve Gram (+) Basil oldugu belirlenenmikroorganizmanın hangi ekstrasellüler enzimleri salgıladıgı biyokimyasal yöntemlerlebelirlendi. Bakteri üretimi SmF teknigi ile gerçeklestirildi ve buradan elde edilen üstsıvıdan -amilaz, pullulanaz, -galaktosidaz ve proteaz aktivite tayinleri yapıldı. Budogrultuda en iyi aktivite -amilaz ve pullulanaz ile elde edildigi için daha sonrakiçalısmalarda bu iki enzimin üretimi gerçeklestirildi.Enzimler için uygun inkübasyon süresi, optimum pH ve optimum sıcaklıkbelirlendi. -Amilazın inkübasyon süresi 48. saat, optimum pH: 6.8 ve optimum sıcaklıgı37 oC olarak bulundu. Pullulanaz için bu veriler 44. saat, pH: 6.4 ve 37 oC olarakbelirlendi.Farklı karbon ve azot kaynaklı substratların Bacillus sp.'de ? amilaz vepullulanaz üretimi üzerine etkisi test edildi. Kullanılan karbon kaynaklı substratlardannisastanın hem ? amilaz hem de pullulanaz üretimini, farklı azot kaynaklı substratlardanise pepton, beef ekstrakt ve triptonun ? amilaz, peptonun ise pullulanaz üretiminiarttırdıgı tespit edildi.Enzimlerin üretimi üzerine farklı nisastaların ve unların etkisi incelenerek patatesnisastası ve bugday ununun hem amilaz hem de pullulanaz üretimini artırdıgı belirlendi.Metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerine etkisi incelendiginde, 10 mM Ca+2' nin-amilaz' ı %103, 50 mM Ca+2' nin pullulanazı %105 aktive ettigi tespit edildi. 50 mMMn+2 ve 10 mM Zn+2' nin -amilaz' ı sırasıyla %85.89 ve %71.25, 10 mM ve 50 mMZn+2'nin pullulanazı %97.68 ve % 97.14 inhibe ettigi belirlendi.Anahtar kelime: -amilaz, pullulanaz, optimizasyon parametreleri, Bacillus sp.