Paraoksonaz enziminin saflaştırılarak grelin hormonuna karşı kinetiğinin araştırılması

Bu çalışmada, metabolizma için büyük öneme sahip olan Paraoksonaz 1 (E.C. 3.1.1.2. ve E.C. 3.1.8.1.) enzimi, sığır karaciğerinden saflaştırılmaya çalışılmıştır. Bu amaçla homojenizasyon, ultrasantrifüj, % amonyum sülfat çöktürmesi, DEAE-Sefaroz iyon değişim kromatografisi ve Sefadeks G-200 jel filtrasyonu kromatografisi sırasıyla uygulanmıştır. Bu işlemler sonucunda Paraoksonaz 1 enzimi 23,93 U/mg protein spesifik aktivite ile homojenata göre 26,30 kat saflaştırılmıştır. Saflaştırılan Paraoksonaz 1 enziminin molekül ağırlığı SDS-PAGE ile 45,2 kDa olarak hesaplanmıştır. Paraoksonaz 1 enziminin pH:7,1 ve 37 0C'de optimum aktivite gösterdiği saptanmıştır. Substrat olarak fenil asetat kullanıldığında Km değeri 0,074 + 0,002 mM ve Vmax değeri 36,42 U/mg olarak hesaplanmıştır. Paraoksonaz 1 enziminin aktif grelin hormonuna etki ettiği ve aktif grelin hormonunu 20 dakika sonunda % 61,20 oranında inaktif greline dönüştürdüğü bulunmuştur.Anahtar Kelimeler : Paraoksonaz 1, saflaştırma, sığır karaciğeri, grelin, HPLC