The role of miRNA-155 and miRNA-23 as immunomodulator of Klebsiella pneumoniae patient infected with pneumonia

Klebsiella pneumoniae, bağışıklık sistemi baskılanmış hastaları enfekte eden fırsatçı bir bakteridir. Çalışmanın hedefleri, mikroribonükleik asitlerin (miRNA-23 ve miRNA-155) hasta serumunda K. pneumoniae enfeksiyonlarını bulmak için biyobelirteç olarak ne kadar iyi çalıştığını bulmak, hastalarda K. pneumoniae'yi izole etmek ve teşhis etmek ve interlökinler ve moleküler patogenez hakkında en güncel bilgileri vermektir. olmak üzere dört yaş grubuna ayrılmıştır. Irak'ın başkenti Bağdat'taki Bağdat Eğitim Hastanesi ve Tüberküloz Enstitüsündeki iki hastaneye Ekim 2022 ile Mart 2023 tarihleri arasında başvuran hastalardan yüz elli örnek (balgam, akciğer sıvıları ve kan) steril kaplarda toplanmıştır. K. pneumoniae izolatlarının yüzde yetmiş beşi, bağışıklık ve moleküler düzeyleri incelemek için 75 hasta serumu örneği kullanılarak 150 örnekten doğrulanmıştır. Mikroskobik ve biyokimyasal analizler ve VITEK® 2 Kompakt sistem ile bakteri tanısı doğrulandıktan sonra, bakterilerin Macckonkey agarda laktozu fermente ettiği ve oksidaz testi için negatif ancak katalaz testi için pozitif olduğu bulunmuştur. Hastalar dört yaş grubuna ayrıldı, birinci grup (25-35 yaş), ikinci grup (36-45 yaş), üçüncü grup (46-55 yaş) ve dördüncü grup (56-70 yaş) yaş ve cinsiyetle eşleşen görünüşte sağlıklı kontroller Irak ulusal kan bankasına bağış yapan kişilerden 75 kan örneği toplandı. Hasta ve sağlıklı grubun serumundaki interlökin düzeyi de ELISA kullanılarak değerlendirildi. Sağlıklı kontrol grubunun serum IL-1ꞵ düzeylerinin ortalama değeri (86.75 ± 2.31) pg/mL, (345.14 ± 7.18) pg/mL'ye kıyasla daha düşüktü. Pnömoni hastalarında IL-34 düzeyleri ise kontrole (74.51 ± 1.55) kıyasla anlamlı bir artış (154.48 ± 15.8) pg/ml göstermiştir. Serum TLR4 düzeyinde de hastalarda (10.17 ± 0.22) ng/ml ile kontrole (2.38 ± 0.06) ng/ml kıyasla anlamlı bir artış (P< 0.01) söz konusu olmuştur. Alıcı işletim karakteristiği (ROC) eğrisi sonuçlarına göre, IL-1ꞵ, IL- 34 ve TLR4 için gerçek pozitif sonuçlar gözlenmiştir. ROC ve eğri altındaki alan (AUC), IL-1ꞵ, IL-34 ve TLR4 reseptörlerinin sağlıklı kontrollere kıyasla pnömoni hastaları için potansiyel biyobelirteçler olarak tanısal gücünü değerlendirmek için kullanılmıştır. MiRNA-23 ve miRNA-155 de RT-PCR kullanılarak tanınmış ve K. pneumoniae'nin patojenitesinin, daha önce enfekte olmuş hastaların serumunda bulunan dört grubun her birinde miRNA-23 ve miRNA-155'in göreceli ekspresyon seviyesinin ∆CT'sinin bireysel sonuçlarına göre farklılık gösterdiği bulunmuştur. miRNA-155 ∆CT (sırasıyla 8.334 ± 2.193 ve -3.518 ± 0.618) ve sağlıklı kontrollerin ortalaması (sırasıyla 1.169 ± 1.669 ve -7.475 ± 0.698) ile ilgili olarak, sadece birinci ve ikinci gruplar hasta serumu ortalama ± S. E.'deki göreceli ifade düzeylerinde anlamlı bir farklılık göstermiştir. E. Hastaların miRNA-23 ekspresyonunu içeren ∆CT değerinde yalnızca ikinci grupta anlamlı bir fark gözlenmiştir; bu değer kontrol grubununkine (4.689 ± 0.763) kıyasla kabaca (9.544 ± 0.749) idi. Analiz, miRNA-23 ve miRNA-155 genlerinin K. pneumoniae'ye karşı tetiklenen ifade düzeylerine yanıt olarak değişiklik gösteren kat değişimini 2 -(∆∆C T ) belirlemiştir. Ayrıca, mevcut çalışmada miRNA-23 ve miRNA-155 genlerinin kat değişiklikleri 2 -(∆∆C T ) testinin gösterdiği gibi, K. pneumoniae, birinci gruptaki hastaların serumunda miRNA-23 ve miRNA-155'in ifade düzeylerini önemli ölçüde artırmada daha etkili olmuştur. Bu test, birinci gruptaki miRNA-23 ve miRNA-155 genleri arasında skora göre anlamlı bir fark olduğunu göstermiştir (sırasıyla %10.52 ve %5.65). Ayrıca, çalışma iki, üç ve dört numaralı gruplarda miRNA-23 ve miRNA-155 ekspresyonunun düşük seviyelerde olduğunu ortaya koymaktadır 2.501, ayrıca kat değişimi 2 -(∆∆C T ) analizi anlamlı bir farklılık göstermemiştir. miRNA-23, miRNA-155 ve interlökinler IL-1β, IL-34 ve TLR4'ün 2 -(∆∆C T ) kat değişimlerinin ortalama ± S.E.'si arasındaki karşılaştırma testi, pozitif korelasyonlar ve anlamlı P-değerleri bulmak için yapılmıştır. Birinci grubun sonuçlarına göre miRNA-23 ile IL-1β, IL-34 ve TLR4 arasında negatif korelasyon gözlenirken, miRNA-155 sadece TLR4 ile pozitif korelasyon göstermiştir (0.511) ve IL-1β, IL-34 ve TLR4 ile hem miRNA-23 hem de miRNA-155 arasındaki fark son derece anlamlıdır (P<0.01). Ayrıca, K. pneumoniae, bu çalışmada miRNA-23 ve miRNA-155 genlerinin kat değişiklikleri 2 -(∆∆C T ) testi ile gösterildiği gibi, grup birdeki hastaların serumunda miRNA-23 ve miRNA-155 ekspresyon seviyelerini önemli ölçüde artırmada daha etkili olmuştur. Bu test, birinci gruptaki miRNA-23 ve miRNA-155 genleri arasında skora göre anlamlı bir fark olduğunu göstermiştir (sırasıyla %10.52 ve %5.65). Ayrıca, çalışma iki, üç ve dört numaralı gruplarda miRNA-23 ve miRNA-155 ekspresyonunun düşük seviyelerde olduğunu ortaya koymaktadır 2.501, ayrıca kat değişimi 2 -(∆∆C T ) analizi anlamlı bir farklılık göstermemiştir. miRNA-23, miRNA-155'in 2 -(∆∆C T ) kat değişimlerinin ortalama ± S.E. arasındaki karşılaştırma testi, interlökinler IL-1β, IL-34 ve TLR4'ün ortalama ±S.E. pozitif korelasyonlarını ve anlamlı P-değerlerini bulmak için yapılmıştır. Birinci grubun sonuçları, miRNA-23 ile IL-1β, IL- 34 ve TLR4 arasında negatif bir korelasyon gözlemlerken, miRNA-155 sadece TLR4 ile pozitif bir korelasyona sahipti (0.511) ve IL-1β, IL-34, TLR4 ile hem miRNA-23 hem de miRNA-155 arasındaki fark son derece anlamlı olmuştur (P<0.01). Ayrıca, grup iki verileri miRNA-23 ile IL-1β, IL-34 ve TLR4 arasında yüksek pozitif korelasyon gösterirken (sırasıyla 0.983, 0.969 ve 0.376), miRNA-155 IL-1β ve IL-34 ile pozitif korelasyon sergilemiştir (sırasıyla 0.982 ve 0.966). IL-1β ve IL-34'ün yanı sıra miRNA- 23 ve miRNA-155 genleri arasında anlamlı farklılıklar söz konusu olmuştur (P< 0.01). Üçüncü grubun verilerine göre, miRNA-23 ve miRNA-155 sırasıyla (0.959, -0.527) ve (0.958, -0.440) ile IL-1β ve IL-34 ile pozitif korelasyon göstermiş ve her iki gen de sadece bu iki interlökin ile oldukça kritik bir fark (P< 0.01) ortaya koymuştur. Dördüncü grubun verileri miRNA-23, miRNA-155 ve IL-34, TLR4 arasında sırasıyla (0.983, 0.668) ve (0.982, 0.427) değerlerinde pozitif korelasyonlar olduğunu göstermiştir. IL-1β, IL-34, TLR4 ve miRNA-23, miRNA-155 arasında hem P-değerlerinde (P< 0.01) hem de (P< 0.05) anlamlı farklılıklar bulunmuştur. Çalışma, hastalarda K. pneumoniae enfeksiyonlarının erken teşhisi için interlökinler IL-1β, IL-34 ve TLR4 ile miRNA-23 ve miRNA-155 genlerinin biyobelirteç olarak etkinliğini değerlendirmektedir. Gen ekspresyonunda 2 -(∆∆C T ) miRNA-23 ve miRNA-155 seviyeleri düşük olan iki, üç ve dördüncü gruplardaki hastalar K. pneumoniae enfeksiyonu açısından daha yüksek risk altında olabilir. maruziyet, bağışıklık fonksiyonu da dahil olmak üzere pnömoni ile ilgili biyolojik süreçlerde rol oynayan dolaşımdaki miRNA'ları etkileyebilir. Birinci gruptaki tüm hastalar, daha yüksek kat değişiklikleri ile önemli farklılıklar sergilemiştir 2 -(∆∆C T ) miRNA-23 ve miRNA-155 gen ifadesi seviyelerinde. Bubiyobelirteçler K. pneumoniae enfeksiyonlarının erken teşhisi için potansiyel taşımaktadır.