Pulpa kaynaklı kök hücrelerin biyomateryal ve dentin üzerine tutunmasına konsantre büyüme faktörünün etkisi

Bu çalışmanın amacı insan molar dişlerinin pulpasından kök hücreleri izole etmek ve bu hücrelerin MTA, Biodentine ve dentin üzerinde tutunmasına ve farklılaşmasına konsantre büyüme faktörünün (CGF) etkisini immunohistokimyasal, kolorimetrik ve mikroskobik tekniklerle değerlendirmektir. Pulpa kök hücreleri, insan 3. molar dişlerin pulpasından elde edildi. Aseptik şartlarda izole edilen pulpa dokusu parçalara ayrılarak alfa-MEM ortamda 40 gün kültüre edildi. Farklılaştırılmamış hücreler stoklanarak kök hücre bankası oluşturuldu ve deneylerde pasajlanarak kullanıldı Hücrelerin kök hücre karakterizasyonu CD90, CD105, CD73, CD44, CD19, CD45 ve CD34, CD11b, CD14, CD19, CD79α ve HLA-DR yüzey antijenleri ile kit kullanılarak flow sitometri ile analiz edildi. Kültürlenen hücreler kontrol amaçlı osteosit ve adipositlere farklılaştırıldı. Deneylerde kullanmak üzere kök parçalarını oluşturmak için insan üst santral dişlerinin, kök kanalları standart şekilde genişletildi ve vertikal olarak 2 simetrik parçaya ayrılarak boyları 6 mm olacak şekilde kesildi. Çalışmada; 1. Grup sadece dentin, 2.grup sadece pulpa kök hücreleri, 3.grup sadece MTA, 4.grup sadece Biodentine, 5.grup Dentin +MTA, 6. Grup Dentin + Biodentine, ve 1. 2. 5. ve 6. Grupların CGF eklenmiş haliyle toplam 10 adet deney grubu oluşturuldu. Biodentine veya MTA kullanılan gruplarda, biyomateryal kanal oluklarının yarı uzunluğuna (3mm) uygulandı, geri kalan dentin kısmı açıkta bırakıldı. CGF gönüllü hastalardan kan alınarak elde edildi ve taze olarak örneklerin üzerine yerleştirildi. Daha sonra örneklerin üzerine pulpa kök hücreleri ekilerek, hücre kültür kabında inkübe edildi. Örneklere 14 ve 21 gün sonra MTT ve ALP aktivite testi uygulandı. Kalsiyum iyonlarının belirlenmesi için örnekler Alizarin Red S ile boyandı. Örnekler taramalı elektron mikroskobunda (SEM) incelenerek, fotoğraflandı. CGF kullanılan gruplarda, CGF'siz gruplara göre anlamlı olarak daha fazla hücre tutundu ve çoğaldı. MTA içeren gruplar kontrol grubuna göre daha az hücre sayısı gösterirken, Biodentine içeren grupta kontrol grubuna göre anlamlı olarak daha fazla sayıda hücre gözlendi. ALP aktivitesi, tüm gruplarda kontrol grubuna göre daha yüksek bulundu. Bu bulgu Alizarin Red S boyaması ile de desteklendi. SEM incelemelerinde, CGF kullanılan gruplarda hücrelerin sayısının ve tutunmasının anlamlı olarak daha iyi olduğu gözlendi.