Cisplatin direncini aşma arayışı: ATP7B düzenlemesinde transkripsiyon faktörlerinin dCas9-Apex2 (Caspex) aracılığıyla belirlenmesi ve cisplatin direncinde bir düzenleyici olarak TOX4'ün tanımlanması

ATP7B geninin düzenlenmesinde belirli transkripsiyon faktörlerinin ve epigenetik modifikasyonların tanımlanması, kanser ilaç direnci mekanizmalarına yönelik terapötik stratejilerin geliştirilmesinde yeni perspektifler sunabilir. Bu çalışmada, ATP7B'nin promoteriyle etkileşime giren proteinleri belirlemek için genomik lokus proteomik dCas9-Apex2 (CASPEX) kullanılmıştır. Bu, transkripsiyon faktörlerinin ve epigenetiklerin ATP7B'nin düzenlenmesindeki rolünün daha iyi anlaşılmasını sağlayabilir ve sonuç olarak ATP7B işlev bozukluğu ve kanser ilaç direnci ile ilişkili hastalıkların tedavisine katkıda bulunabilir. CASPEX aracılığıyla transkripsiyon faktörlerini incelemek için ATP7B'ye hedeflenen etkili gRNA'larla +1 transkripsiyon başlangıç noktasından -3000 baz çiftine kadar olan 7 bölge seçilmiştir. Ayrıca, ATP7B promotöründe gRNA'ların hedefleme verimliliği, kromatin immünopresipitasyonu (ChIP) ile doğrulanmıştır. Ayrıca, ATP7B CASPEX'in kitle spektrometrisi sonuçlarından, ATP7B ve kanserle ilişkili çeşitli parametrelere sahip 150'den fazla zenginleştirilmiş transkripsiyon faktörü adayı belirlenmiştir. Doğrulamalarımız sonucunda, TOX4'ün ATP7B ve Cisplatin direncinin HEK293T ve HUH7 hücre hattında yeni bir düzenleyici olduğunu tespit ettik. TOX4 Knockout, ATP7B seviyesini azaltırken, TOX4'ün aşırı ifadesi transkripsiyonel olarak ATP7B seviyelerini arttırmaktadır. Ardından, TOX4'ün ATP7B promoterine bağlanmasını eksogen luciferaz deneyleri ve ChIP-qPCR ile doğruladık. Ek olarak, TOX4'ün ekpresyonuna bağlı olarak hücrelerin cisplatine karşı hassaslaştırılması ve direnç geliştirilmesi doğrulandı. Özet olarak, bu bulgular, ATP7B geninin düzenlenme mekanizmaları hakkında yeni perspektifler sunmakta ve ATP7B işlev bozukluğu ile ilişkili hastalıkların anlaşılması ve tedavisi için önemli olabilir, bunlar arasında kanser ilaç direnci de bulunmaktadır. Bu transkripsiyon faktörlerinin ve TOX4'ün ATP7B geninin ana düzenleyicileri olarak tanımlanması, gelecekteki kanser terapötik stratejilerde hedef alınabilecek potansiyeli taşımaktadır. Anahtar Kelimeler: ATP7B, Cisplatin Direnci, TOX4, Proteomiks, Moleküler Biyoloji