Safra asitlerinin biyolojik örneklerden tayini için Sk-kS/KS yönteminin geliştirilmesi ve validasyonu

Safra asidi atipik steroid molekül olup karaciğer enzimleri ve bağırsak bakterileri tarafından kolesterolden sentezlenir. Birincil ve ikincil safra asidi olarak ikiye ayrılır. Safra asitleri sentez basamaklarında konjuge hale gelerek farklı safra asitlerini oluşturur. Günümüzde başta analitik kimya olmak üzere çok çeşitli alanda farklı birçok analizde kullanılmakta olan sıvı kromatografisi/kütle spektrometresi (SK-KS/KS), biyolojik numune analizlerinde de yüksek hassasiyete sahip olması sebebiyle sıklıkla kullanılmaktadır. Yirmi üç farklı safra asidi ve bir tane iç standart kullanılarak, biyolojik örneklerde safra asidi tayini için SK-KS/KS parametreleri ve farklı sabit fazların optimizasyonu yapılmıştır. Optimizasyon için parçalama voltajları, parçalama enerjileri, iyon kaynağı, iyonlaştırıcı ajan, iyon modu gibi MS parametreleri her bir safra asidi için optimize edilmiş, hareketli faz, sıcaklık, akış hızı gibi parametreler ile sabit fazlar denenmiştir. Elde edilen optimizasyon parametrelerine göre negatif iyonlaştırma modunda, elektrosprey iyon kaynağı ile 100 x 3,00 mm, 1,8 µm, 95 Å, C18 sabit fazı kullanılarak 60 °C sıcaklıkta, %0,5 formik içeren su ve %20 asetonitril içeren metanol hareketli fazı ile analiz yapılmıştır ve optimum çalışma şartlarında ICH M10 biyoanalitik validasyon kılavuzuna göre validasyonu yapılmıştır. Kan, idrar ve gaita örnekleri kantitatif analiz için hazırlama prosedürü uygulanarak analiz edilmiştir. Analiz sonuçları ICH M10 biyoanalitik validasyon kılavuzunda belirtilen limitler çerçevesinde değerlendirilmiştir.