Şiddetli akut solunum sendromu koronavirüs-2 (SARS-CoV-2)'nin vero hücre hattı ile farklı kültür teknikleri kullanılarak üretimi

Dünya Saglık Örgütü (DSÖ)'nün uluslararası halk sağlığı acil durumu ilan etmesine neden olan SARS-CoV-2, 23 Kasım 2022 tarihi itibariyle, 6,6 milyondan fazla kişinin ölümüne neden olmuştur. Hastalığa karşı dünya genelinde onaylı 50 aşı bulunurken bunlardan 11 tanesi DSÖ tarafından onaylanmıştır. 2021 yılı aşı üretim verilerine göre Covid-19 için 11,15 milyar doz aşı üretilmiştir. Toplam aşı üretiminin yaklaşık %45'ini inaktif aşılar oluşturmaktadır. İnaktif aşı prosesinin ilk adımı canlı virüs üretimidir. SARS-CoV-2 üretiminin ve saflaştırılmasının optimizasyonu, büyük ölçek öncesi verimli olan sistemin belirlenmesi için önemlidir. Bu çalışmanın amacı, statik kültür için Cell Factory (CF) sisteminde ve süspanse kültür için mikrotaşıyıcılı (MC) spinner flask sisteminde Vero hücreleriyle yüksek ve düşük serum konsantrasyonunda SARS-CoV-2 alfa varyantı antijen üretiminin ve saflaştırılmasının incelenmesidir. Klarifiye kültürün PEG presipitasyonuyla elde edilen pelletlerin antijen miktarı SDS-PAGE yöntemiyle belirlenmiştir. Yapılan hesaplamalara göre hücre üretimi esnasında %5 ve virus üretimi esnasında %1 FBS şartlarında daha yüksek verim elde edilmiştir. İlk çalışma sonuçlarına göre antijen verimleri; CF sisteminde 502,5 µg antijen/litre ve MC sisteminde 355,9 µg antijen/litre şeklinde elde edilmiştir. Saflaştırma çalışmaları için, CF sistemiyle yapılan ikinci çalışmada verim 756,7 µg antijen/litre değerine yükseltilebilmiştir. Konsantre antijen multimodal (Capto Core 400, CC400) ve iyon-değişim (Nuvia HP-Q) kromatografi prensiplerine göre AKTA pure-150 sisteminde saflaştırılmıştır. Saflaştırma sonucunda CC400 için %89 ve Nuvia HP-Q için %74 verim değerleri bulunmuştur. Diğer yandan CC400 kolonu safsızlıkları uzaklaştırma açısından da daha iyi sonuç vermiştir. Sonuç olarak, SARS-CoV-2 antijeninin laboratuvar ölçekli üretimi için Cell Factory sistemi daha verimli bulunmuş ve saflaştırma prosesi için CC400 kolonu en iyi sonucu vermiştir.