Terapötik peptit tilapia piscidin 4' ün (TP4) pichia pastoris ekspresyon sisteminde rekombinant üretimi ve HT-29 kolorektal kanser hücreleri üzerine etkisinin araştırılması

Tilapia piscidin 4 (TP4), Nil Tilapyası (Orechromis niloticus) balıklarının bağışıklık sisteminde yer alan ve yüksek antimikrobiyal aktiviteye sahip katyonik bir peptittir. Antimikrobiyal özelliğinin yanı sıra yara iyileştirici ve antikanser özellikleri dahil olmak üzere çeşitli biyolojik özelliklere sahiptir. Tez çalışması kapsamında, TP4 peptitinin kodon optimizasyonlu dizisi, Pichia pastoris KM71H ekspresyon sisteminde güçlü ve indüklenebilir AOX1 promotörünü içeren pPICZA vektörü kullanılarak eksprese edilmiştir. Rekombinant TP4 peptiti, Ni-NTA afinite kromatografisi ile saflaştırılmış ve antibakteriyel aktivitesi MİK ve MBK yöntemleri ile doğrulanmıştır. TP4, HT-29 kolon kanseri ve HGF-1 sağlıklı dişeti fibroblast hücrelerine uygulanarak hücrelerdeki sitotoksik etkiler MTT, TAS-TOS, MDA yöntemleri ile apoptozda yer alan genler (BAX, BCL-2, CASP3) ve proteinlerin ekspresyon düzeyleri ise RT-qPZR ve ELISA yöntemleri kullanılarak araştırılmıştır. Bu tez kapsamında rekombinant TP4'ün insan HT-29 hücre hattında güçlü antikanser aktiviteye sahip olduğu ilk kez gösterilmiştir.