Walterinnesia morgani zehrinin SHSY5Y ve U87MG sinir hücre hatları üzerindeki sitotoksisitesinin, CXCR-4 yüzey reseptör ekspresyonu ve Na+/K+-ATPaz aktivitesine etkisinin araştırılması

Yılan zehirleri çok çeşitli toksin, enzim, büyüme faktörü, aktivatör ve inhibitör içeren geniş kapsamda biyolojik aktiviteye sahiptir. Kalbin hareketi, kan dolaşımı, zarların geçirgenliği, sinirlerin ve kasların işlevi gibi hayati süreçlere etkili oldukları bilinmektedir. Çöl kobrası olarak bilinen W. Morgani yılan zehri, kanser ve nörodejeneratif hastalıklar için etki potansiyeline sahip nörotoksik maddeler içermektedir. Çalışma kapsamına W. morgani zehrinin sitotoksik etkileri SHSY5Y, U87MG, HeLa, MCF-7, HEK-293, A549, mPanc-96, Vero ve PC3 kanser hücre hatları üzerinde MTT testi ile belirlenmiştir. Yapılan MTT testi sonucu hesaplanan IC50 değerleri baz alınarak zehrin apoptoz, aktif kaspaz-3 ve hücre döngüsü üzerindeki etkileri flow sitometri analizleri ile belirlenmiştir. U87MG ve SHSY5Y hücre çizgileri üzerinde akış sitometrisi analizi ile farklı konsantrasyonlarda W. morgani ham zehri (IC50 ve 2xIC50) ile muamele edildikten sonra CXCR-4 ve Na+ / K+ -ATPaz aktivitesi belirlenmiştir. Ayrıca, Na+ / K+ -ATPaz aktivitesi üzerindeki zehir etkisi, western blot analizi ile doğrulanmıştır. Ayrıca, kolonal insan barsak kanseri hücrelerinde (CaCo-2), TEER (Transephitelial Electrical Resistance) değişimi belirlenmiştir. Sitotoksisite testi sonuçlarına göre SHSY5Y ve U87MG hücrelerinin IC50 değerleri sırasıyla 1.02 ve 5.53 μg/ml olarak belirlenmiştir. Flow sitometri analizleri, W. morgani zehrinin SHSY5Y ve U87MG hücrelerinde Na+/K+ -ATPaz aktivitesi kapsamında inhibitör etkiye sahip olduğunu göstermiştir. Western blot analizleri de doza bağımlı bir şekilde bu sonucu doğrulamaktadır. Ayrıca, W. morgani yılan zehrinin monolayer CaCo-2 hücrelerinde TEER değerlerini azaltarak zar geirgenliğini artırdığı belirlenmiştir. Sonuç olarak W. morgani yılan zehrinin nöronal hücrelerde membran geçirgenliği üzerinde etkili olduğu belirlenmiş olup detaylı çalışmalarda etkin peptid/protein belirlenecektir.