Aspergillus niger genomunda bulunan glukoamilaz enzimini kodlayan genin klonlanması

Glukoamilaz (GA), glikoz gereken her prosesin hidroliz basamağına katılan bir ekzoenzimdir. Çok önemli bir endüstriyel enzim olan glukoamilaz enzimi nişasta, glikojen ve oligosakkaritlerin indirgen olmayan uçlarından glikozidik bağlarını hidrolize ederek D-glukoz üretir. Glukoamilazı endüstri için bu kadar önemli kılan ana neden nişasta proseslerinde oynadığı roldür. Nişasta; gıda, tekstil, deterjan ilaç ve kağıt endüstrisinin ana kaynaklarından biridir. Glukoamilaz doğada; yüksek nişasta hidroliz kapasitesi sayesinde endüstride kullanılan GAI ve GAII olmak üzere iki form halinde bulunur. Birçok bakteri, maya ve fungi çeşitli formlarda glukoamilaz üretebilirler ancak özellikle fungal glukoamilaz endüstri için önem teşkil eder. Bu çalışmada; rekombinant glukoamilaz enziminin Pichia pastoris' de üretilmesi amaçlanmıştır.. Böylece endüstri açısından önemli olan glukoamilaz enzimi laboratuvar ölçeğinde, daha ekonomik ve daha kolay çoğaltılan mayada rekombinant olarak üretilebilecektir. Bu amaçla A.niger' da buunan GAI formundaki glukoamilaz enzimini koldlayan glaA genini taşıyan plasmid dizayn edilmiş ve Pichia pastoris' aktarılmıştır. glaA geninin moleküler klonlanması, dizi analizi ile ve transfeksiyon, koloni PCR ve enzim aktivitesinin belirlenmesi ile doğrulanmıştır. Buna ek olarak elde edilen recombinant enzimin farklı koşullardaki aktivitesi incelenmiştir.