Cu-IDA bağlı manyetik nanoparçacıkların hazırlanması ve benzaldehit liyaz (BAL) enziminin saflaştırılmasında kullanılması

Metal afinite ligand immobilize edilmiş silika kaplı manyetik nanoparçacıklar hazırlanmış ve bu parçacıklar Benzaldehid Liyaz (BAL, EC 4.1.2.38) enziminin immobilizasyonu için kullanılmıştır. Öncelikle manyetik nanoparçacıklar birlikte çökme yöntemi ile bazik ortamda Fe+2 ve Fe+3'ün çöktürülmesiyle sentezlenmiştir. Daha sonra Fe3O4-SiO2 nanoparçacıklar elde etmek için sol-jel metodu kullanılarak Fe3O4 nanoparçacıklarının üzerine silika kaplanmıştır. Fe3O4-SiO2 yüzeyine 3-glycidyloxypropyl trimethoxysilane (GPTMS) ve iminodiacetic acid (IDA) sırasıyla immobilize edilmiş ve ardından BAL adsorpsiyonu için Cu+2 yüklenmiştir. Fe3O4-SiO2 manyetik nanoparçacıkları karakterize etmek için X-Işını Difraksiyonu (XRD), Geçirimli Elektron Mikroskobu (TEM), Taramalı Elektron Mikroskobu (SEM) ve IDA-Fe3O4 parçacıklarının karakterizasyonu için de Fourier dönüşümlü kızılötesi (FT-IR) spektrosskopisi kullanılmıştır. Silika-kaplı manyetik nanoparçacıkların boyutları Scherrer denkleminden 11,8 nm olarak hesaplanmıştır. TEM görüntüsünden parçacıkların ortalama 10-11 nm boyutunda homojen bir dağılımda ve Scherrer denkleminden elde edilen sonuçla uyum içinde olduğu tespit edilmiştir. FT-IR sonuçları manyetik nanoparçacıkların yüzeyine IDA gruplarının başarılı bir şekilde tutturulduğunu göstermiştir.Metal afinite ligand immobilize edilmiş silika kaplı manyetik nanoparçacıklar Benzaldehid Liyaz (BAL, EC 4.1.2.38) enziminin immobilizasyon yoluyla saflaştırılması için kullanılmıştır. Bu yöntemle manyetik nanoparçacıkların E.coli BL21(DE3)pLysS/BALHIS ham özütünden 6XHis kuyruklu BAL'ı seçici olarak yüksek kapasite (40 mg/g) ayırdığı Sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforez (SDS-PAGE) ile kanıtlanmıştır. Bu türde yüzeyi fonksiyonlandırılmış manyetik parçacıkların histidin kuyruklu rekombinant proteinlerin saflaştırılması için için kullanılabileceği gösterilmiştir.