Hipoalerjenik süt ürünü ve inek sütü alerjisi şiddetini reaktif ve toleranslı bireylerde ayırt etmek için biskoti, pişmiş, fermente ve pastörize süt kullanarak dolaylı in-HOUSE elısa geliştirilmesi

Besin alerjilerinde tetikleyici ajanlardan kaçınmak hala tedavinin temel dayanağıdır. Ancak eliminasyon diyetine uyum veya kazara alerjen maruziyeti gibi zorluklar, son yıllarda besin alerjisi tedavisinde araştırmaları artırmıştır. Oral immünoterapi (OIT), alerjenin günlük tüketilen doza ulaşılıncaya kadar belirli zaman aralıklarında artan dozlarda uygulanması olarak tanımlanır. Fırınlanmış süt ürünleri ile immünoterapi güvenli görünse de bazı hastalarda anafilaksi oluşabilir. Bu nedenle, fırınlanmış süt ürünü ''kek''ten daha az alerjeniteye sahip hipoalerjenik bir ürün geliştirmek, inek sütü alerjisinin duyarsızlaştırma tedavisinde yeni bir ufuk açabilir. Bu çalışmamızda esas olarak geleneksel kekten daha hipoalerjenik bir ürün yapmak ve çeşitli süt ürünlerine karşı tolerans durumunu belirlemek için dolaylı in-house ELISA testi geliştirmeyi hedefledik. Western blot, dolaylı in-house ELISA ve bazofil aktivasyon testi (BAT) ile süt alerjili hastalarda farklı şiddetlerde süt alerjisini IgE reaktivitesi ile karşılaştırabilmek amaçlandı. İlk olarak kek iki kez pişirilerek "biskoti" adı verilen hipoalerjenik bir ürün adayı geliştirildi. Proteinler, aday ürün (biskoti) kek ve pastörize sütten izole edildi ve toplam protein konsantrasyonu Bradford tahlili ile belirlendi. Tüm ürünler için farklı süt protein içerikleri SDS-PAGE ve proteomiks ile gösterildi. Koç Üniversitesi Hastanesi Çocuk Alerji Bölümüne başvuran süt alerjisi olan hastalardan serum örnekleri alındı. Süt spesifik IgE (sIgE) bağlanma deneyleri Western blot, dolaylı in-house ELISA ile hasta serumları kullanılarak ve BAT hastaların tam kanları kullanılarak yapıldı. Farklı süt proteinleri bant yoğunluğu analizinde, hipoalerjenik ürün adayında kazein bant yoğunluğunun keke göre daha düşük olduğu gözlendi (p=0.014). Proteomiks analizler, tüm süt ürünleri için (biskoti 1 saat, biskoti 2 saat ve biskoti 3 saat, geleneksel kek) pişirme süresi artıkça tüm kazein fraksiyonlarının ve β-laktoglobulinin yoğunluğunun azaldığını ortaya koydu. Normal keke kıyasla yeni geliştirilen hipoalerjenik ürüne (biskoti) karşı süt alerjisi olan çocukların serumlarındaki süt sIgE'lerinin düşük bağlanma kapasitesi, önce western blotlama (p=0.0012) ve ardından dolaylı in-house ELISA (p=0.0001) ile gösterildi. Süt, peynir ve yoğurt ile yapılan dolaylı in-house ELISA deneylerinde, toleranslı hastaların süt, peynir ve yoğurt için OD değerlerinin reaktif olanlara göre düşük olduğu bulundu. Son olarak, BAT için biskoti üst sıvısı uyarıcı alerjen olarak kullanıldı ve sonuçlar bu testin besin yükleme testi testi öncesi ileri deneylerde kullanılabileceğini gösterdi. Bu çalışmada yeni geliştirilen hipoalerjenik ürün "biskoti"nin düşük alerjenitesi in vitro deneylerle kanıtlanmıştır. Hipoalerjenik ürünümüz, şiddetli süt alerjisi olan ve pişmiş süte tepki gösteren hastalarda güvenli ve faydalı bir tedavi seçeneği olabilir. Bu ürünün düşük alerjenitesini in vivo deneylerle (besin yükleme testleri) doğrulamayı ve sonraki adımlarda tolerans indüksiyonundaki etkilerini göstermeyi amaçlıyoruz