İnsan GCSF proteininin koekspresyon ile çözünür formda üretilmesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu

İnsan granülosit koloni uyarıcı faktör (GCSF) hematopoetik bir büyüme faktörü olup nötrofil yapımında ve farklılaşmasında önemli rol oynamaktadır. Klinikte oldukça önemli bir yere sahip olan GCSF, kemoterapiye bağlı nötropeni ve AIDS tedavisi gibi immün sistemin ihtiyaç duyduğu nötrofil seviyesine ulaşmasına yardımcı olması amacıyla kullanılmaktadır. GCSF gibi özellikle insan kökenli olan bazı yabancı biyomoleküller Escherichia coli (E. coli) ekspresyon sistemi ile ekspresyonu sırasında farklı etmenlerden dolayı bazen agregasyona uğrar ve inklüzyon cisimciği oluştururlar. Bu çok değerli moleküllerin geri kazanımı için çoğu zaman yeniden katlama (refolding) işlemleri uygulanır, fakat yine de kayda değer miktarda protein kullanılamaz halde kalır. Refolding işlemleri hem masraflı hem zaman alıcı hem de tam verimli etkiye sahip olmamaktadır. Bu nedenlerden dolayı, bu tez çalışmasında koekspresyon yöntemi ile şaperon proteinlerin kullanılması düşünülmüştür. Bu kapsamda beş şaperon plazmit sistemi kullanılarak (pG-KJE8, pGro7, pKJE7, pG-Tf2, pTf16) GCSF'nin çözünür formda üretimi sağlanmaya çalışılmıştır. Yapılan deneyler sonucunda pKJE7 plazmidinin GCSF'yi çözünür formda elde etmede daha etkili olduğu bulunmuştur. Bu sistem ile koeksprese edilen GCSF proteini afinite kromotografisiyle yüksek saflıkta elde edilmiş ve insan göbek bağı endotel hücreleri (HUVEC) üzerindeki proliferatif aktivitesi ortaya koyulmuştur. Sonuç olarak, daha önce E. coli ekspresyon sisteminde inklüzyon cisimciği olarak çöken GCSF, şaperon proteinler ile koekspresyon neticesinde doğru şekilde katlanarak, işlevsel ve saf olarak elde edilmiştir.