Mısır Püskülünden(Stylus maydis) polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması ve karaterizasyonu

Bu çalÕúmada, mÕVÕr püskülü (Stylus maydis) polifenol oksidaz (PFO) enziminin saflaúWÕUÕlmasÕ yapÕlmÕú ve bazÕ kinetik özellikleri incelenmiútir. MÕVÕr püskülünden ekstrakte edilen polifenol oksidaz, (NHࢩ(ࢧSOࢩ) amonyum sülfat) çöktürmesi, diyaliz, ultrafiltrasyon ve jel kromatografisi prosodürleri kullanÕlarak saflaúWÕUÕldÕ. SaflaúWÕUÕlan enzim tek bir bant olarak SDS-PAGE'de elde edilmiútir. MÕVÕr püskülünün PFO enziminin molekül a÷ÕrlÕ÷Õ ise yaklaúÕk 158 kDa civarÕnda gözlemlenmiútir. Katekol ve 4-metil katekol substratlarÕ kullanÕlarak, PFO enziminin optimum pH ve VÕcaklÕk de÷erleri belirlenmiútir. Polifenol oksidaz aktivitesi 4-metilkatekol ve katekol için 420 nm'de spektofotomtrik olarak ölçülmüútür. Optimum sÕcaklÕk katekol için 40°C ve 4- metilkatekol için 30°C bulunmuútur. Optimum pH katekol için 8 ve 4-metilkatekol için 6 olarak tespit edilmiútir. AyrÕca PFO'nÕn substrat spesifikli÷i ve ÕVÕ inaktivasyonu incelenmiútir. PFO enziminin optimum pH ve sÕcaklÕkta katekol ve 4-metil katekol substratlarÕ için Km ve Vmax de÷erleri Linewear-Burk yöntemi ile bulunmuútur. Vmax/ Km de÷erlerine göre PFO enzimi için en uygun substratÕn katekol oldu÷u bulunmuútur. AyrÕca katekol kullanÕldÕ÷Õnda artan inaktivasyon süresine paralel olarak PFO aktivitesinin bariz bir úekilde azaldÕ÷Õ gözlemlenmiútir. EDTA, SDS ve sodyum azidin PFO aktivitesi üzerine inhibisyon etkisi katekol substratÕ kullanÕlarak etkisi incelendi. Bu çalÕúmada sÕrasÕyla sodyum azidin % 26.6 EDTA'nÕn % 22.2 ve SDS'nin % 12.2 oranÕnda enzimi inhibe etti÷i tespit edildi. AyrÕca sukroz, fruktoz, riboz ve glikoz gibi karbonhidratlarÕn PFO aktivitesi üzerine etkisi araúWÕUÕlmÕúWÕr. Fruktoz ve ribozun enzimi % 17 oranÕnda aktive etti÷i, glikozun % 16, sukrozun ise % 4 oranÕnda aktive etti÷i tespit edilmiútir. Anahtar Kelimeler: Stylus maydis,Polifenol oksidaz ,substrat spesifikli÷i,inhibisyon