Sıçan testis torsiyonu iskemi/reperfüzyon hasarında, pı3k-akt-mtor yolakları üzerinden cape ve EGCG'nin koruyucu etkilerinin değerlendirilmesi

Testis torsiyonu veya spermatik kordun torsiyonu özellikle çocuklarda ve genç erkeklerde görülen, çoğunlukla cerrahi işlem gerektiren ürolojik vakalar arasında yer almaktadır. Erken tanı konulup testisin korunduğu vakalar dahil olmak üzere, erkek infertilitesinde gözlenen en önemli nedenlerden biridir. Testis torsiyonu iskemi/reperfüzyon hasarı üzerine yapılan çalışmalarda, koruyucu olarak birçok antioksidan çeşitli vitamin ve ilaç kullanılmıştır. Epigallocatechin-3-gallate (EGCG) yeşil çayın % 80'ini oluşturan flavonoidler arasında yer almaktadır. Yeşil çayda yer alan EGCG ile, testiküler androjen üretimindeki sinyalizasyon yolakları olan protein kinaz A (PKA) ve protein kinaz C'nin (PKC) ilişkili olduğu, ancak hangi yolağı takiben testesteron üretimi yaptığı yada testis üzerindeki koruyucu işlevi olduğu bilinmemektedir. Caffeic acid phenethyl ester (CAPE-Propolis) ise flavonoidlere benzeyen bal arısı propolisinin aktif bir bileşenidir. CAPE'nin antioksidan, antienflamatuvar, antiviral ve immünomodülatör olduğu gösterilmiştir. mTOR (mammalian target of rapamycin), birçok kritik hücre içi olayları düzenleyen temel kinaz enzimlerinden biridir . mTOR, serin-threonin kinaz ailesinden PI3K/AKT/mTOR sinyal yolağına dahildir. mTOR hücre büyümesi, hücre çoğalması, protein sentezi ve transkripsiyonu, anjiyogenez, apoptoz ve otofajiyi etkilemektedir Bu çalışmada, genç erişkin Wistar Albino sıçanlarda testis torsiyonu iskemi/reperfüzyon sonrası oluşan doku hasarında, P13K-Akt-mTOR sinyal ileti yolaklarının öneminin ve antioksidan ajanlar arasında yer alan Epigallocatechin-3-gallate (EGCG) ve Caffeic acid phenethyl ester (CAPE)'in testis hasarı üzerindeki koruyucu etkilerinin biyokimyasal, histopatolojik ve immunohistokimyasal olarak değerlendirilmesi planlanmıştır. Biyokimyasal kan analizlerinde MDA, Katalaz ve 8-OHG düzeyleri ölçülerek değerlendirilecektir. Histopatolojik olarak testiste seminifer tübülüsü oluşturan spermatogenez sürecindeki tüm hücrelerin ve Sertoli hücreleri ile interstisyel Leydig hücrelerinin morfolojik olarak Johnson's skorlaması ile değerlendirilmesi yapılacaktır. Histopatolojik inceleme ile, iskemi/reperfüzyon hasarında EGCG ve CAPE uygulamalarının koruyucu etkileri olup olmadığı ışık mikroskop altında değerlendirilmiş olacaktır. DNA hasarı TUNEL yöntemi kullanılarak değerlendirilecektir. TUNEL pozitif boyanan hücreler % olarak belirlenerek, sonuçlar gruplar arasında karşılaştırmalı olarak ANOVA istatistik testi ile değerlendirilecekltir. İmmünohistokimyasal olarak PI3K-Akt-MTOR yolağında yer alan primer antikorları ile, apoptotik süreçte ekstrensek ve intrensek yolakların etkilenmelerini göstermek amacı ile Caspas 8 ve Caspas 9 primer antkorları ile indirek immunohistokimyasal yöntemle değerlendirme yapılacaktır. İmmunohistokimya boyanma skorları, yarı-kantitatif yöntemle hafif (1), orta (2), şiddetli (3) ve çok şiddetli (4) olarak belirlenerek h-Skor hesaplanacaktır. Toplam boyanan hücre sayıları belirlenerek (boyanma yoğunluğu +1) ile çarpılarak belirlenen h-skor'lar gruplar arasında ANOVA istatistik testi ile karşılaştırmalı olarak değerlendirilecektir. Bu çalışma sonunda, EGCG ve CAPE'in infertilite nedenlerinden biri olan testis torsiyonu iskemi/reperfüzyon hasarı üzerine etkileri moleküler düzeyde değerlendirilmiş olacaktır. Tedavinin koruyucu etkileri izlenerek, antioksidanların tek tek ya da birlikte kullanıldıklarında sinerjik etkilerinin önemi ortaya konulacaktır