Sucul mikroorganizmalardan fitaz üretim olanaklarının araştırılması

Bu çalışmada atıksu arıtma tesislerinden izole edilen Ochrobactrum anthropi'den fitaz enziminin üretimi ve karakterizasyonu gerçekleştirilmiştir. Fitaz enzimini optimum koşullarda üretebilmek için enzim üretim ortamının optimizasyonu yapılmıştır. Maksimum fitaz üretimi için en iyi karbon kaynağı %1 maltoz, en iyi azot kaynağı ise %1 maya özütü olarak saptanmıştır. Ayrıca, optimum pH 8.5, sıcaklık 37oC, çalkalama hızı 300 rpm, inokulum miktarı OD600: 0,06, inokulum yaşı ise 9 saat olarak bulunmuştur. Optimum koşullar altında üretilen intraselüler fitaz enziminin jel filtrasyon kromatografisi ile saflaştırıldıktan sonra SDS-PAGE analizinde yaklaşık olarak 22 kDa ve 13 kDa ağırlığında iki protein bandı elde edilmiştir. Enzim optimum aktivitesini 40oC ve pH 5.4'te göstermiştir. Enzim 90oC'de 30 dakika ön inkübasyon ile aktivitesini %117'e çıkarmıştır. Enzim aktivitesi 1 mM'lık Triton X-100 (%91), Tween-20 (%56) ve Tween-80 (%55) ile önemli derecede inhibe olurken, NaCl (%104), MnSO4 (%105), MgSO4 (%102), gliserol (%106), EDTA (%103), Asetik asit (%117), 2-merkaptoetanol (%109) ile stimüle olmuştur. Bu sonuçlara göre enzimin sahip olduğu karakteristik özelliklerinden dolayı monogastrik hayvanlarda yem katkısı olarak kullanımı sonucunda çevre kirliliğinin önlenebileceği düşünülmektedir. Anahtar Kelimeler: Ochrobactrum anthropi, fitaz, fitik asit, zimogram.