Tetrahymena thermophila insülin benzeri proteinlerininimmüno-afinitik tabanlı belirlenmesi, rekombinant üretimive hormonal karakterizasyonu

İnsülin (INS), relaksin (RLN) ve insülin-benzeri büyüme faktörlerinden (IGF-I ve IGF-II) oluşan insülin süperailesi, yüksek ökaryotlarda glikoz metabolizmasını düzenler. Literatürde, düşük ökaryot silli tekhücreli Tetrahymena türlerinde insülin reseptörlerinin varlığının gösterilmesi ile memeli insülinlerinin hücre içine glikoz alımını tetiklemesi, insülin kodlayan genlerin varlığının hipotezlenmesine neden olmuştur. Bu çalışmada ise, insülin benzeri genler ve kodladığı proteinler; T. thermophila'dan immünoçöktürme, aktivite tabanlı amonyum sülfat çöktürmesi, gen büyüklüğü, sinyal peptid varlığı, dizi benzerliği, korunmuş sistein motifi ve filogenetik analiz gibi yöntemler kullanılarak belirlenmiştir. İlk belirlenen T. thermophila insülin benzeri protein TtINS2, 66 amino asitten oluşmaktadır ve bu preproproteinin N-ucunda 17 amino asitlik hücre dışına salgılatma sinyal dizisi hipotetik olarak tespit edilmiştir. Proprotein ise 49 amino asit uzunluğunda ve 7 adet korunmuş sistein içermektedir. T. thermophila'da rekombinant üretilen TtINS2-10XHis'in monomer formu 6,5 kDa büyüklüğünde olup insan insülini gibi hücre dışına salgılanarak dimer, tetramer ve hekzamerler oluşturmaktadır. TtINS2-sfGFP füzyon proteini, fluoresan mikroskop analizlerine göre sil kökleri ile salgı keselerine lokalize olmaktadır. Saflaştırılan TtINS2 proteini, T. thermophila'da hücre dışından hücre içine glikoz alımını tetiklemesinin yanında, hücre bölünmesini arttırıcı ve hücre ölümünü geciktirici hormon aktivitelerine sahiptir. Bu tez çalışmasında tek hücreli organizmalarda (Protista) insülin benzeri TtINS2 hormonu ilk defa karakterize edilmiş ve böylelikle düşük ökaryotlarda insülin hormon ailesinin ve insülin sinyal yolağının varlığı ispatlanmıştır.