Tetrahymena thermophila'da rekombinant ilaç üretim verimliliğini düşürebilecek bir proteaz geninin gen silme yöntemiyle genomdan silinmesi ve karakterizasyonu

Bu tez çalışması ile T. thermophila'nın doğal olarak salgıladığı proteazların dış ortama salgılanan protein yapılı rekombinant biyofarmosötikleri parçaladığı ve üretim verimliliğini düşürdüğü hipotezi test edilmiştir. Literatür araştırması ve biyoinformatik yaklaşımlarla belirlenen sekretom proteaz genlerinden yüksek ekspresyona sahip CTH34 geni somatik homolog rekombinasyon, CYP6, CTH40, CTH90 ve CTH115 genleri ise co-Delesyon yöntemleriyle makroçekirdek genomundan silinmiş, doğal hücre ırkı ile mutant hücre sekretomlarının proteolitik aktivitesi kazein ve rituksimab substratlarına karşı in vitro olarak ölçülmüş ve SDS-PAGE ile substrat degredasyonu tanımlanmıştır. CTH34'ün KO edildiği ırkta sekretomal proteolitik aktivite %34,3 oranında düşerken büyüme eğrisinin logaritmik ve durağan faz hücre sayısında ~%50 oranında azalma bulunmuştur. CYP6-KO ırkında ise rituksimab substratının parçalanmasında belirgin bir düşüş SDS-PAGE'de gözlemlenirken büyüme eğrisinin durağan faz hücre sayısında ~%25 civarında azalma görülmüştür. T. thermophila'nın verimli bir şekilde rekombinant protein ilaç üretimine CTH34 ve CYP6 genleri gibi proteaz genlerinin genomdan silinmesiyle uygun hale getirilebileceği sonucuna varılmıştır.